黃瓜芽黃突變相關(guān)基因的初步定位研究.pdf

1、目的：以新泰密刺黃瓜種子根尖作為材料，得到清晰穩(wěn)定的黃瓜根尖中期染色體C 顯帶和G顯帶，為更好的區(qū)分黃瓜染色體提供準(zhǔn)確的依據(jù)，進(jìn)而把與芽黃突變相關(guān)的基因初步定位到染色體上。
　　 方法：
　　 (1)采用改良的中期染色體C 顯帶方法和ASG 法G 顯帶制作方法，制作黃瓜中期染色體C顯帶和G顯帶。
　　 (2)用熒光實時定量PCR 對HemA1基因片段在芽黃和正常黃瓜葉片中的差異表達(dá)進(jìn)行了定量分析。
　　

2、(3)采用熒光原位雜交(FISH)法對HemA1基因片段進(jìn)行了染色體定位。
　　 結(jié)果:
　　 （1）常規(guī)壓片法和去壁低滲法得到的染色體濃縮程度較大，顯示染色體帶紋較少，單倍染色體帶紋總數(shù)都為12條，而利用改良后的方法得到的染色體濃縮程度較小，顯示的染色體條紋數(shù)也多,其單倍染色體條紋總數(shù)為30條，每條染色體都顯示了明顯的著絲粒帶、中間帶和末端帶。將用ASG 法得到的清晰、穩(wěn)定的黃瓜中期G 顯帶染色體通過顯微觀察、照片測量

3、，對染色體進(jìn)行了配對，并對帶紋特征進(jìn)行了分析。除了第一對染色體相對臂比大于1.70,屬于sm 型，其余六對都屬于m 型。單倍染色體具有G 顯帶條紋數(shù)22條。
　　 （2）HemA1基因在黃瓜正常葉片中的相對表達(dá)量為1.00×103，在芽黃突變體葉片中的相對表達(dá)量為0.38×103。HemA1基因在芽黃突變體的表達(dá)下調(diào)。
　　 （3）通過熒光原位雜交技術(shù)對HemA1基因進(jìn)行染色體定位，雜交信號較弱，背景顏色較深，染色體定位

4、不準(zhǔn)確。
　　 結(jié)論：
　　 （1）染色體顯帶的多少和帶紋特征與染色體的濃縮程度有關(guān)，濃縮程度越大，顯示條紋數(shù)越少。使用不同的藥品對材料進(jìn)行預(yù)處理，會使染色體停留在不同的時期，也就會使制片中染色體的濃縮程度也不同。另外，染色體的C顯帶和G顯帶之間并無明顯的界限，因為染色體制片、顯帶過程中的每一個環(huán)節(jié)對染色體顯帶都很關(guān)鍵，每一個環(huán)節(jié)的細(xì)微變化都會使染色體顯示不同的帶紋，所以只要處理條件適合，可以得到染色體C 帶和G 帶的中