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文檔簡介
1、Hepcidin是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種調(diào)節(jié)小腸鐵吸收的抗菌肽。本研究通過給3日齡仔豬注射不同劑量的右旋糖酐鐵注射液構(gòu)建仔豬缺鐵和鐵超載模型,利用實時熒光定量PCR技術(shù)研究不同鐵負(fù)荷對仔豬Hepcidin基因表達量的影響,并克隆出豬Hepcidin的基因編碼區(qū),為治療仔豬貧血和人類鐵代謝疾病提供理論依據(jù)。
通過給3日齡仔豬不注射或3倍量注射右旋糖酐鐵構(gòu)建仔豬缺鐵和鐵超載模型,用原子吸收法檢測血清、肝臟和脾臟中鐵的含量,同時對血
2、清生化指標(biāo)和氧化酶進行測定和分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),鐵超載組仔豬肝臟、脾臟和血清中鐵的含量顯著增加(P<0.01),鐵缺乏組中肝臟中鐵的含量顯著降低(P<0.01),脾臟和血清中鐵的含量分別減少了4.7倍和188倍(P>0.05),模型構(gòu)建成功;與對照組相比,鐵超載組中堿性磷酸酶、白/球蛋白和甘油三酯含量顯著降低(P<0.05),總蛋白、球蛋白、總膽紅素、直接膽紅素、總膽固醇和高密度脂蛋白含量顯著提高(P<0.05);而鐵缺乏組中堿性磷酸酶和總
3、膽紅素含量顯著降低(P<0.05),白/球蛋白和高密度脂蛋白含量顯著提高(P<0.05);鐵超載組血清中丙二醛、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化物酶、黃嘌呤氧化酶含量顯著高于對照組(P<0.05),超氧化物歧化酶含量增加了15.76%(P>0.05);而鐵缺乏組血清中谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶、過氧化物酶含量顯著降低(P<0.05),丙二醛含量比對照組降低了3.49倍(P>0.05),超氧化物岐化酶含量比對照組提高了61%(P>0.05)
4、。
利用實時熒光定量PCR技術(shù)研究不同鐵負(fù)荷對仔豬肝臟Hepcidin mRNA表達量的影響,結(jié)果表明,缺鐵組Hepcidin mRNA表達量降低113倍,而鐵超載組的表達量則升高了7倍,差異極顯著(P<0.01)。
本試驗成功提取了仔豬肝臟的mRNA,設(shè)計引物,利用RT-PCR擴增出Hepcidin基因的編碼區(qū),純化回收目的基因,并連接到克隆載體PMD19-T中。經(jīng)質(zhì)粒PCR檢測,XbaI和KpnI雙酶切鑒
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