不同鐵負(fù)荷對仔豬Hepcidin mRNA表達量的影響.pdf

1、Hepcidin是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種調(diào)節(jié)小腸鐵吸收的抗菌肽。本研究通過給3日齡仔豬注射不同劑量的右旋糖酐鐵注射液構(gòu)建仔豬缺鐵和鐵超載模型，利用實時熒光定量PCR技術(shù)研究不同鐵負(fù)荷對仔豬Hepcidin基因表達量的影響，并克隆出豬Hepcidin的基因編碼區(qū)，為治療仔豬貧血和人類鐵代謝疾病提供理論依據(jù)。
　　 通過給3日齡仔豬不注射或3倍量注射右旋糖酐鐵構(gòu)建仔豬缺鐵和鐵超載模型，用原子吸收法檢測血清、肝臟和脾臟中鐵的含量，同時對血

2、清生化指標(biāo)和氧化酶進行測定和分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鐵超載組仔豬肝臟、脾臟和血清中鐵的含量顯著增加(P＜0.01)，鐵缺乏組中肝臟中鐵的含量顯著降低(P＜0.01)，脾臟和血清中鐵的含量分別減少了4.7倍和188倍(P＞0.05)，模型構(gòu)建成功；與對照組相比，鐵超載組中堿性磷酸酶、白/球蛋白和甘油三酯含量顯著降低(P＜0.05)，總蛋白、球蛋白、總膽紅素、直接膽紅素、總膽固醇和高密度脂蛋白含量顯著提高(P＜0.05)；而鐵缺乏組中堿性磷酸酶和總

3、膽紅素含量顯著降低(P＜0.05)，白/球蛋白和高密度脂蛋白含量顯著提高(P＜0.05)；鐵超載組血清中丙二醛、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化物酶、黃嘌呤氧化酶含量顯著高于對照組(P＜0.05)，超氧化物歧化酶含量增加了15.76％(P＞0.05);而鐵缺乏組血清中谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶、過氧化物酶含量顯著降低(P＜0.05)，丙二醛含量比對照組降低了3.49倍(P＞0.05)，超氧化物岐化酶含量比對照組提高了61％(P＞0.05)

4、。
　　 利用實時熒光定量PCR技術(shù)研究不同鐵負(fù)荷對仔豬肝臟Hepcidin mRNA表達量的影響，結(jié)果表明，缺鐵組Hepcidin mRNA表達量降低113倍，而鐵超載組的表達量則升高了7倍，差異極顯著(P＜0.01)。
　　 本試驗成功提取了仔豬肝臟的mRNA，設(shè)計引物，利用RT-PCR擴增出Hepcidin基因的編碼區(qū)，純化回收目的基因，并連接到克隆載體PMD19-T中。經(jīng)質(zhì)粒PCR檢測，XbaI和KpnI雙酶切鑒