低氧、環(huán)境雌激素和酸化不同環(huán)境脅迫因子對(duì)海水青鳉hepcidin表達(dá)的影響研究.pdf

1、海洋生態(tài)系統(tǒng)的復(fù)雜性使海洋生物面臨低氧、酸化、環(huán)境污染物等多重環(huán)境脅迫，特別是沿海海域的海洋生物。研究表明低氧、酸化及環(huán)境雌激素EE2均能影響生物體的生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖及基因表達(dá)等。Hepcidin是一類(lèi)與防御素類(lèi)似的富含半胱氨酸的抗菌肽，除具有抗菌功能外還參與機(jī)體鐵代謝;貧血、缺氧、致炎物質(zhì)以及細(xì)胞因子等均會(huì)影響其表達(dá)。本論文在實(shí)驗(yàn)室前期研究分離獲得的海水青鳉（Oryziasmelastigma）hepcidin兩種變體基因OM-hep

2、1和OM-hep2以及黑鯛(Acanthopagrusschlegelii)hepcidin2（AS-hep2）基因的基礎(chǔ)上，研究低氧對(duì)黑鯛hepcidin2及其相關(guān)調(diào)控基因表達(dá)的影響;探究單獨(dú)低氧、單獨(dú)酸化以及低氧與EE2聯(lián)合作用對(duì)海水青鳉hepcidin及其相關(guān)調(diào)控基因表達(dá)的影響。主要結(jié)論如下:
　　1.分析了低氧刺激下海水青鳉OM-hep1和OM-hep2基因、HIF(HpoxiaInducibleFactor)、IL-6/

3、STAT3以及NF-κB基因的表達(dá)模式。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-timePCR)結(jié)果顯示在低氧條件下OM-hep1和OM-hep2基因表現(xiàn)出不同的表達(dá)特性，可能與其不同的生理學(xué)功能相關(guān)。HIF途徑中的OM-HIF-1α和OM-VEGF(VascularEndothelialGrowthFactor)基因表達(dá)未受低氧影響，OM-EPO(Eythropoietin)基因被低氧顯著性誘導(dǎo)，且表達(dá)量與氧濃度呈負(fù)相關(guān)，氧濃度越低表達(dá)量越高，

4、因此該基因可以用作檢測(cè)低氧的指示基因。低氧對(duì)OM-IL-6和OM-STAT3基因表達(dá)的影響作用短暫，可能是機(jī)體對(duì)低氧的一種應(yīng)激反應(yīng)。NF-κB基因OM-p65在低氧刺激下的表達(dá)模式與OM-hep2相同，與OM-hep1的表達(dá)沒(méi)有相關(guān)性，推測(cè)OM-hep2的表達(dá)可能通過(guò)NF-κB途徑介導(dǎo)。
　　2.研究了低氧條件下黑鯛AS-hep2和AS-HIF-1α的表達(dá)特性。AS-hep2在低氧刺激下表達(dá)上調(diào)，在96h時(shí)被顯著性誘導(dǎo)表達(dá)。這表明

5、AS-hep2可能在低氧刺激下發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。AS-HIF-1α基因不受低氧的影響。
　　3.分析了環(huán)境濃度EE2和低氧聯(lián)合刺激對(duì)OM-hep1、OM-hep2、OM-HIF-1α、OM-VEGF和OM-EPO基因表達(dá)的影響。OM-HIF-1α基因在刺激后48h和96h被誘導(dǎo)表達(dá);OM-VEGF基因在刺激后96h表達(dá)上調(diào);而OM-EPO基因在刺激后的3-96h均顯著性上調(diào)表達(dá)，且高于單獨(dú)低氧的誘導(dǎo)作用。表明這三個(gè)基因都受環(huán)境濃度

6、EE2和低氧聯(lián)合刺激的誘導(dǎo)，OM-EPO對(duì)環(huán)境濃度EE2和低氧共同作用的敏感性高于OM-HIF-1α和OM-VEGF。環(huán)境濃度EE2與低氧共同作用對(duì)OM-hep1和OM-hep2基因的表達(dá)沒(méi)有顯著影響。
　　4.探討了酸化刺激對(duì)海水青鳉發(fā)育過(guò)程中OM-hep1、OM-hep2和OM-CYP1A基因的表達(dá)影響。OM-hep1和OM-hep2的基因隨著胚胎發(fā)育表達(dá)上調(diào)，推測(cè)hepcidin在胚胎發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮了免疫作用。研究發(fā)現(xiàn)，OM