禽康散在CEF內(nèi)抗NDV效果及對SPL增殖和NO分泌影響的研究.pdf

1、雞新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病。該病是危害養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展的主要疫病之一，至今仍未得到有效控制。早期研究表明復(fù)方中藥禽康散在體內(nèi)具有明顯的抗NDV作用。本課題在此基礎(chǔ)上，研究復(fù)方中藥禽康散防治雞新城疫的細胞生物學(xué)機理，為該藥臨床應(yīng)用及新藥研發(fā)提供理論依據(jù)。為此進行一系列試驗并取得如下結(jié)果：
　　 1.禽康散對雞胚成纖維細胞(CEF)增殖影響本試驗將禽康散提取液(1g/ml)用培養(yǎng)液稀釋成2-2

2、、2-3、2-4、2-5、2-6、2-7、2-8、2-9、2-10g/ml九個濃度，按每孔0.1ml分別加入到體外培養(yǎng)的CEF中，通過測定細胞OD值變化，判定不同濃度中藥對細胞增殖的影響。結(jié)果表明，禽康散在濃度為2-6、2-7、2-8g/ml時具有明顯促進CEF增殖的作用，在濃度為2-2、2-3、2-4g/ml時具有明顯抑制CEF增殖的作用。藥物最大無毒濃度為2-5g/ml。
　　 2.禽康散體外抗NDV作用本試驗將2-5、2-

3、7、2-9g/ml三個濃度中藥提取液0.1ml和0.1mlNDV（200倍TCID50）以三種方式[即中藥與病毒混合感作后加入（直接殺滅組）、先加入中藥后接種病毒（預(yù)防組）、先接種病毒后加入中藥（治療組）]加入體外培養(yǎng)的CEF中，通過測定CEFOD值的變化判定各濃度中藥在三個環(huán)節(jié)上的抗病毒作用。結(jié)果顯示，直接殺滅組的病毒抑制率最高(0.749)，表明禽康散對NDV的體外直接殺滅作用最好。預(yù)防組與治療組的病毒抑制率分別為0.525、0.4

4、74，但兩者無顯著性差異。
　　 3.禽康散對體外培養(yǎng)雞脾淋巴細胞(SPL)增殖的影響本試驗將禽康散提取液(1g/ml)用培養(yǎng)液稀釋成2-2、2-3、2-4、2-5、2-6、2-7、2-8、2-9、2-10g/ml九個濃度，按每孔0.1ml分別加入到體外培養(yǎng)的雞脾淋巴細胞中，通過MTT法測定細胞OD值變化，判定不同濃度中藥對細胞增殖的影響。結(jié)果顯示，禽康散在濃度為2-4、2-5、2-6、2-7g/ml時具有明顯促進體外培養(yǎng)SPL

5、增殖的作用，在濃度為2-2g/ml時具有明顯抑制SPL增殖的作用。
　　 4.禽康散對雞脾淋巴細胞NO分泌的影響本試驗將2-2、2-5、2-8g/ml三個濃度中藥提取液0.1ml分別加入體外培養(yǎng)的SPL中，用試劑盒測定培養(yǎng)液中NO及一氧化氮合酶(NOS)含量，判定禽康散對淋巴細胞NO分泌的影響。結(jié)果顯示，三個濃度中藥提取液均能極顯著增加NO及NOS含量，以中藥濃度2-2g/ml組（接種量0.1ml，即25mg)效果最明顯。