雙花顆粒對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　 本實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)以秀山金銀花為主要原料自主研制成雙花顆粒制劑。本文對(duì)雙花顆?？垢螕p傷作用及作用機(jī)理進(jìn)行了研究，觀察雙花顆粒對(duì)分別由四氯化碳和酒精誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用。為充分開(kāi)發(fā)雙花顆粒的保肝作用，研制開(kāi)發(fā)抗肝損傷新藥提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.雙花顆粒對(duì)CCl4誘導(dǎo)的小鼠化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用
　　 將ICR雄性小鼠60只，按體重隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組、CCl4模型組、硫普

2、羅寧陽(yáng)性對(duì)照組(250mg·Kg-1·bw-1)，雙花顆粒低、中、高劑量組(1.25,2.5,5.0g·Kg-1·bw-1)。每天灌胃2次，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組分別灌胃等容積的生理鹽水。連續(xù)14d。第14d給藥1小時(shí)后，除空白對(duì)照組外其余各組小鼠按體重均腹腔注射0.10％CCl4橄欖油溶液20mL/kg造模。禁食不禁水，18h后，稱(chēng)量體重，摘眼球取血，3000r/min離心15分鐘，取血清，測(cè)血中AST、ALT的活性。并快速取出肝臟，

3、稱(chēng)重，計(jì)算肝指數(shù)。距肝大葉邊緣0.5cm處取一小塊肝組織，進(jìn)行冰凍切片，HE染色，觀察肝組織形態(tài)學(xué)改變。另制備10％的肝臟勻漿，測(cè)定肝組織中的SOD活性及MDA含量。
　　 2.雙花顆粒對(duì)小鼠酒精性肝損傷的保護(hù)作用
　　 將ICR雄性小鼠60只，按體重隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組、CCl4模型組、聯(lián)苯雙酯陽(yáng)性對(duì)照組(150mg·Kg-1·bw-1)，雙花顆粒低、中、高劑量組(1.25,2.5,5.0g·Kg-1·bw-1)，

4、空白對(duì)照組和模型對(duì)照組分別灌胃等容積的生理鹽水。11:00除空白對(duì)照組外其余的小鼠按16 mL/kg灌胃56°紅星二鍋頭白酒。每天2次。連續(xù)14d，末次給藥后，按照1的方法進(jìn)行取材與指標(biāo)的檢測(cè)。
　　 結(jié)果：
　　 1.雙花顆粒對(duì)CCl4誘導(dǎo)的小鼠化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用
　　 結(jié)果顯示，模型組與正常對(duì)照組比較，肝臟指數(shù)顯著升高，血清ALT及AST活性均明顯增高，肝組織勻漿中丙二醛含量明顯增高，SOD活性顯著下降(

5、P＜0.01)。模型組小鼠肝細(xì)胞索排列紊亂，多數(shù)肝細(xì)胞呈細(xì)胞水腫，出現(xiàn)脂肪變性，可見(jiàn)肝細(xì)胞片狀壞死并伴有炎細(xì)胞浸潤(rùn)，上述結(jié)果表明小鼠急性肝損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建立成功。
　　 雙花顆粒低、中、高劑量組(1.25,2.5,5.0g·Kg-1·bw-1)與模型組相比，小鼠肝臟指數(shù)下降，除中劑量組外，高、低組均與模型組比較，差異顯著，(P＜0.05)，血清ALT、AST明顯降低(P＜0.05)，雙花顆粒中劑量和高劑量給藥組可極顯著提高肝組

6、織SOD的活性(P＜0.01)，降低肝損傷小鼠肝組織MDA含量(P＜0.05)。
　　 HE切片顯示：與模型組比較，各治療組均有明顯的改善，肝細(xì)胞的壞死、脂肪變性、細(xì)胞水腫及炎性浸潤(rùn)等病理改變減輕，雙花顆粒高劑量組效果好于其它治療組，該組中大多數(shù)小鼠未見(jiàn)脂肪變性和肝細(xì)胞壞死現(xiàn)象。
　　 2.雙花顆粒對(duì)小鼠酒精性肝損傷的保護(hù)作用
　　 結(jié)果顯示，模型組與正常對(duì)照組比較，肝臟指數(shù)顯著升高，血清ALT及AST活性均明顯

7、增高，肝組織勻漿中丙二醛含量明顯增高，SOD活性顯著下降(P＜0.01)。HE染色顯示，模型組小鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊，肝細(xì)胞索排列紊亂，肝小葉結(jié)構(gòu)不清，可見(jiàn)多處肝細(xì)胞壞死病灶，大部分細(xì)胞胞漿出現(xiàn)不同程度疏松，可見(jiàn)形成大量脂滴空泡，肝小葉中央及壞死區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯。上述結(jié)果表明小鼠急性肝損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建立成功。
　　 雙花顆粒低、中、高劑量組(1.25,2.5,5.0 g·Kg-1·bw-1)與模型組相比，小鼠肝臟指數(shù)均顯著降低(

8、P＜0.05)，血清中ALT明顯降低(P＜0.01)，AST活性相比模型組有顯著的降低(P＜0.05)。雙花顆粒中劑量和高劑量給藥組可極顯著提高肝組織SOD抗氧化酶的活性(P＜0.05)，降低肝損傷小鼠肝組織MDA含量(P＜0.05)。
　　 HE切片顯示：跟模型組相對(duì)照，各劑量給藥組均不同程度的改善小鼠的肝細(xì)胞壞死程度變性及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，雙花顆粒能明顯抑制脂肪變性，減少肝細(xì)胞的脂滴數(shù)量。雙花顆粒高劑量組效果好于其它治療組，該組