乙肝扶正排毒膠囊對實(shí)驗(yàn)性肝損傷的作用研究.pdf

1、目的： “乙肝扶正排毒膠囊”是治療慢性乙型病毒性肝炎的中藥復(fù)方制劑。本論文研究以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，借鑒現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究成果，參照我國衛(wèi)生部藥政管理局頒布的《中藥新藥研究指南》，觀察了乙肝扶正排毒膠囊對四氯化碳(CCl4)、D-氨基半乳糖(D-Gal)所致的小鼠急性肝損傷的影響。從藥效學(xué)研究上探討其作用及機(jī)制，為臨床應(yīng)用和開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.實(shí)驗(yàn)藥物 受試藥物是乙肝扶正排毒膠囊，源自楊運(yùn)高教授的臨床

2、驗(yàn)方。陽性對照藥是甘草甜素片。 2.模型制作 小鼠一次性腹腔注射0.12％(V/V)CCl4花生油溶劑0.2ml/20g體重建立CCl4急性肝損傷模型。小鼠一次性腹腔注射D-Gal的生理鹽水溶液800mg/kg體重建立成D-Gal急性肝損傷模型。 3.分組和給藥 3.1CCl4急性肝損傷模型實(shí)驗(yàn) 60只小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只。灌胃給藥，每天1次，共7天。末次給藥2小時(shí)后，除正常對照組以外，其

3、余各組小鼠造模；16h后稱量體重、取血、處死、取肝。 正常對照A組：無菌生理鹽水，注射無菌生理鹽水 模型對照A組：無菌生理鹽水，注射CCl4 甘草甜素A組：甘草甜素水溶液0.039g/kg·d，注射CCl4 中藥低劑量A組：受試藥水溶液0.234g/kg·d，注射CCl4 中藥中劑量A組：受試藥水溶液0.468g/kg·d，注射CCl4 中藥高劑量A組：受試藥水溶液0.936g/kg·d，

4、注射CCl4 3.2D-Gal急性肝損傷模型試驗(yàn) 60只小鼠，分組及給藥同3.1。除正常對照組以外，其余各組小鼠造模。24h后小鼠取血、處死、取肝。 4.檢測指標(biāo) 小鼠一般狀態(tài)、肝臟指數(shù)、肝功能指標(biāo)(ALT、AST、TBIL)、氧化-抗氧化功能指標(biāo)(SOD、MDA)、肝組織病理檢查。 5.統(tǒng)計(jì)方法 方差分析、LSD-t檢驗(yàn)、獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、相關(guān)分析，α=0.05為檢驗(yàn)的顯著性水準(zhǔn)。

5、 結(jié)果： 1.小鼠一般狀態(tài) 兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中均可觀察到：各組小鼠造模前狀態(tài)良好，進(jìn)食及飲水正常，黑褐色顆粒狀大便，毛色潤澤。造模后，除正常對照組以外，其余各組小鼠均表現(xiàn)為不活潑，聚堆，易激惹，反抗性增強(qiáng)，反抗力減弱；其中以模型組最為明顯，小鼠進(jìn)食量及飲水量下降，大便稀軟或不成形，黃綠色，毛色不潤澤，體重下降。 2.乙肝扶正排毒膠囊對小鼠CCl4急性肝損傷的作用 2.1肝臟形態(tài)學(xué)變化 2.1.1肉眼所見正

6、常組肝臟呈紅褐色、質(zhì)軟而脆，模型組肝臟體積明顯增大，表面粗糙，呈土黃色。甘草甜素組和中藥三個(gè)劑量組的肝臟形態(tài)學(xué)變化介于正常組與模型組之間。 2.1.2組織病理學(xué)檢查正常組的肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞呈索狀排列、形態(tài)正常。模型組肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，肝細(xì)胞大片狀壞死、大量炎細(xì)胞浸潤。中藥低劑量組見灶狀壞死、炎細(xì)胞浸潤較多。甘草甜素組的嗜酸性壞死明顯、較多嗜酸性小體，伴炎細(xì)胞浸潤。中藥中劑量組見散在點(diǎn)狀壞死，嗜酸性小體，氣球樣變。中藥高劑量組

7、的肝損傷程度最輕，見少量混濁腫脹、胞漿疏松化。 2.2統(tǒng)計(jì)分析 2.2.1方差分析各個(gè)指標(biāo)(血清ALT、AST、TBIL、肝指數(shù)、MDA、SOD)的各組間存在顯著性差異(均P＜0.05)。 2.2.2LSD-t檢驗(yàn)與正常組相比，CCl4模型組的血清ALT、AST、TBIL、MDA及肝指數(shù)顯著升高、血清SOD下降(均P＜0.05)。與模型組相比，甘草甜素組和乙肝扶正排毒膠囊3個(gè)劑量組的血清ALT、AST、TBIL、

8、MDA下降、血清SOD上升(均P＜0.05)，三個(gè)劑量組呈明顯的量效關(guān)系；但只有乙肝扶正排毒膠囊高劑量組的肝指數(shù)有顯著性差異(P=0.342)。 2.2.3t檢驗(yàn)甘草甜素組與乙肝扶正排毒膠囊中劑量組相比，血清ALT、AST、TBIL、MDA、SOD有顯著性差異(均P＜0.05)。肝指數(shù)無顯著性差異(P=0.742)。說明總體而言乙肝扶正排毒膠囊中劑量的藥效優(yōu)于甘草甜素片中劑量。 2.2.4相關(guān)分析血清ALT、AST水平變

9、化與血清MDA水平變化之間存在正相關(guān)關(guān)系，與血清SOD水平變化之間存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。說明血清MDA、SOD水平即可以直接衡量機(jī)體的脂質(zhì)過氧化程度、抗氧化能力，又可以間接反映肝損傷程度。 3.乙肝扶正排毒膠囊對D-Gal小鼠急性肝損傷的作用 3.1肝臟形態(tài)學(xué)變化 3.1.1肉眼所見正常組肝臟呈紅褐色、質(zhì)軟而脆，模型組肝臟體積明顯增大，表面粗糙，呈土黃色。乙肝扶正排毒膠囊各劑量組及甘草甜素組的肝臟形態(tài)學(xué)變化介于正常組與

10、模型組之間。 3.1.2組織病理學(xué)檢查：正常組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞索排列規(guī)則，未見肝細(xì)胞變性及壞死。模型組見片狀壞死，大量炎細(xì)胞浸潤。中藥低劑量組較模型組為輕，灶狀壞死為多。甘草甜素組與中藥中劑量組的損傷程度相仿，散在少許點(diǎn)狀壞死，伴炎細(xì)胞浸潤。中藥高劑量組散在少量的炎細(xì)胞浸潤、胞漿疏松。 3.2統(tǒng)計(jì)分析 3.2.1方差分析各個(gè)指標(biāo)(血清ALT、AST、TBIL、肝指數(shù)、MDA、SOD)的各組間存在顯著性差異(

11、均P＜0.05)。 3.2.2LSD-t檢驗(yàn)與正常組相比，D-Gal模型組的血清ALT、AST、TBIL、MDA及肝指數(shù)顯著升高、血清SOD下降(均P＜0.05)。與模型組相比，甘草甜素組和乙肝扶正排毒膠囊3個(gè)劑量組的血清ALT、AST、TBIL、MDA及肝指數(shù)降低、血清SOD上升(均P＜0.05)，三個(gè)劑量組呈明顯的量效關(guān)系。 3.2.3t檢驗(yàn)甘草甜素組與乙肝扶正排毒膠囊中劑量組相比，血清ALT、AST、TBIL、MD

12、A、SOD有顯著性差異(均P=0.001)。肝指數(shù)無顯著性差異(P=0.271)。說明總體而言乙肝扶正排毒膠囊中劑量的藥效優(yōu)于甘草甜素片中劑量。 3.2.4相關(guān)分析血清ALT、AST水平變化與血清MDA水平變化之間存在正相關(guān)關(guān)系，與血清SOD水平變化之間存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。說明血清MDA、SOD水平即可以直接衡量機(jī)體的脂質(zhì)過氧化程度、抗氧化能力，又可以間接反映肝損傷程度。 結(jié)論： 乙肝扶正排毒膠囊能顯著降低CCl4和

13、D-Gal導(dǎo)致的急性肝損傷小鼠的血清ALT、AST、TBIL、MDA水平及肝指數(shù)，提高血清SOD活性，并呈一定的量效關(guān)系。肝組織病理切片亦證實(shí)，它能明顯減輕肝細(xì)胞變性、壞死、炎癥反應(yīng)。 因此，乙肝扶正排毒膠囊對CCl4及D-Gal所致的急性肝損傷具有明顯的拮抗作用，其中劑量的藥效優(yōu)于甘草甜素片中劑量。它具有保肝降酶退黃的作用，其機(jī)制可能與促進(jìn)肝細(xì)胞修復(fù)、增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力、清除脂質(zhì)過氧化物有關(guān)。從而為其臨床治療CHB提供了實(shí)驗(yàn)