抗蚜蟲PPA基因高效表達(dá)載體構(gòu)建及其在小麥原生質(zhì)體中的表達(dá)驗(yàn)證.pdf

1、蟲害是威脅農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的一個(gè)世界性問題，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)創(chuàng)造新的抗蟲植物品系對農(nóng)業(yè)害蟲防治、環(huán)境保護(hù)及農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。目前國內(nèi)對于植物凝集素抗蟲基因轉(zhuǎn)化研究大多集中于雪花蓮凝集素(Galanthus nivalis Agglutinin，GNA)基因。天南星科半夏屬的掌葉半夏為我國特有的中草藥，掌葉半夏塊莖的粗提液對蚜蟲有強(qiáng)致死作用，粗提液的主要成分是植物凝集素蛋白(Pinellia-pedatisectaagglutinin，P

2、PA)。轉(zhuǎn)半夏凝集素基因的煙草具有比轉(zhuǎn)雪花蓮凝集素基因更強(qiáng)的抗桃蚜活性。
　　 在單子葉植物中應(yīng)用較廣的為玉米泛素啟動(dòng)子Ubi，它有著啟動(dòng)效率高、甲基化程度低、遺傳性狀穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，Ubi啟動(dòng)子在轉(zhuǎn)基因小麥中有較高活性，表達(dá)效率可達(dá)到CaMV35S啟動(dòng)子的4-5倍。綠色熒光蛋白(GFP)是源于海洋生物水母屬(Aequorea Victoria)的一種發(fā)光蛋白，它作為報(bào)告分子有許多優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定、靈敏度高、熒光反應(yīng)不需要任何底物及輔助因

3、子，使表達(dá)檢測非常簡單，同時(shí)它在細(xì)胞中自主表達(dá)、沒有種屬特異性、對受體細(xì)胞無毒性、對目的基因沒有影響。
　　 本試驗(yàn)的目的是將PPA基因連接到植物表達(dá)載體pCAMBIA1380上(以Ubi為啟動(dòng)子、GFP為報(bào)告基因)，從而構(gòu)建出一個(gè)抗蚜蟲的高效植物表達(dá)載體，為小麥的遺傳轉(zhuǎn)化奠定材料基礎(chǔ)，為植物特別是農(nóng)作物害蟲防治提供了新的基因資源。
　　 本文運(yùn)用基因工程技術(shù)對掌葉半夏凝集素PPA基因進(jìn)行改造，并將其轉(zhuǎn)入真核表達(dá)載體，得