重組牛生長(zhǎng)激素緩釋制劑的活性檢測(cè)及動(dòng)物體內(nèi)釋放規(guī)律研究.pdf

1、生長(zhǎng)激素是由腦垂體前葉嗜酸性細(xì)胞合成和分泌的一種單一肽鏈的蛋白質(zhì)，能夠促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、增加產(chǎn)奶量、提高飼料轉(zhuǎn)化效率和瘦肉率。本實(shí)驗(yàn)主要是立足于重組牛生長(zhǎng)激素的活性檢測(cè)和體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究。 首先通過(guò)手術(shù)建立去垂體大鼠動(dòng)物模型，45只Wistar雄鼠進(jìn)行去垂體手術(shù)后，有35只大鼠成活，手術(shù)成活率77.8％。通過(guò)21天的稱重觀察，發(fā)現(xiàn)有15只大鼠手術(shù)后兩周內(nèi)日增重不超過(guò)1g，判定這些大鼠去垂體完全，手術(shù)成功率達(dá)到33.3％。

2、為了驗(yàn)證重組牛生長(zhǎng)激素的活性，作為對(duì)照組的去垂體大鼠注射PBS120μl/只，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組分別注射重組牛生長(zhǎng)激素溶液50μg/只、100μg/只和200μg/只，連續(xù)注射20天。結(jié)果發(fā)現(xiàn)低、中、高3個(gè)劑量對(duì)去垂體大鼠都具有促生長(zhǎng)的作用，而且大鼠增重的存在劑量依賴性。對(duì)照組大鼠采食量和飲水最少，試驗(yàn)組大鼠采食量和飲水隨注射劑量的增大而增大。在最后一次注射后2小時(shí)采大鼠血液，檢測(cè)血樣中生長(zhǎng)激素濃度發(fā)現(xiàn)，生長(zhǎng)激素的濃度與注射的

3、劑量相對(duì)應(yīng)，對(duì)照組血液中檢測(cè)不到生長(zhǎng)激素，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組血液中的生長(zhǎng)激素分別是3.68ng/ml、5.57ng/ml和6.12ng/ml。由此可以斷定重組牛生長(zhǎng)激素具有促生長(zhǎng)活性。 為驗(yàn)證重組牛生長(zhǎng)激素油混懸制劑體在動(dòng)物的緩釋效果，試驗(yàn)的第1天4個(gè)試驗(yàn)組即試驗(yàn)Ⅰ組，試驗(yàn)Ⅱ組，試驗(yàn)Ⅲ組和試驗(yàn)Ⅳ組的去垂體大鼠分別皮下注射藥物含量為4.2％重組牛生長(zhǎng)激素油混懸長(zhǎng)效注射劑0.84mg/只、1.4mg/只、2.8mg/只和4

4、.2mg/只，對(duì)照組去垂體大鼠皮下注射PBS溶液120ul/只。每天上午稱重1次，連續(xù)稱重32天并觀察大鼠的增重。注射PBS的去垂體大鼠體重相對(duì)比較穩(wěn)定，32天累積增重5.87g，增重6.9％。藥物處理32天后試驗(yàn)Ⅰ組，試驗(yàn)Ⅱ組，試驗(yàn)Ⅲ組和試驗(yàn)Ⅳ組的累積增重分別為18.66％、 18.97％、20.61％和27.38％。注射31天后試驗(yàn)組大鼠的體重仍有增加的趨勢(shì)。上述結(jié)果表明此種油混懸注射劑在體內(nèi)至少能緩釋31天，其有望發(fā)展成為新型長(zhǎng)效

5、制劑。 隨后，將重組牛生長(zhǎng)激素的緩釋劑型在昆明小鼠上做活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。分別以1.5mg/只、3mg/只和6mg/只低、中、高3個(gè)劑量在小鼠背部皮下注射重組牛生長(zhǎng)激素的油混懸長(zhǎng)效注射劑，通過(guò)稱重來(lái)觀察這種緩釋劑型的作用。30天的稱重發(fā)現(xiàn)，3個(gè)試驗(yàn)組的累積增重均高于對(duì)照組，分別為34.14％、40.68％、42.52％和44.50％。這種方法雖然能驗(yàn)證生長(zhǎng)激素的活性，但不能進(jìn)行定量的分析，而且也不容易確定油混懸長(zhǎng)效注射劑的緩釋周期。研