桑樹內(nèi)生真菌菜豆殼球孢菌MOD-1產(chǎn)油脂發(fā)酵條件優(yōu)化及利用淀粉廠廢水的研究.pdf

1、桑樹內(nèi)生菌是生存于健康桑樹體內(nèi)各種組織和器官的細(xì)胞間隙或細(xì)胞內(nèi)，并與宿主之間建立起和諧互作關(guān)系的一類微生物，一些內(nèi)生菌在與宿主桑樹的相互作用過程中可以產(chǎn)生豐富的具有生物活性的次級代謝產(chǎn)物。但目前尚未見關(guān)于桑樹內(nèi)生真菌所產(chǎn)生的活性代謝產(chǎn)物及相關(guān)的應(yīng)用研究報道。
　　 桑樹內(nèi)生菜豆殼球孢菌MOD-1（Mulberry endophyte Macrophominaphaseolina MOD-1）是本實驗室從健康桑樹根系中分離篩選得到

2、的一株內(nèi)生產(chǎn)油真菌（GenBank注冊號為EU250575），經(jīng)測定菌體含油量達22.72％。本論文以MOD-1菌株為研究對象，進行了其產(chǎn)油脂培養(yǎng)基及搖瓶發(fā)酵條件的優(yōu)化，并探討以淀粉廠廢水為培養(yǎng)基質(zhì)，發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂的可行性。主要研究內(nèi)容如下：
　　 1.對Macrophomina phaseolina MOD-1的最佳產(chǎn)油脂發(fā)酵培養(yǎng)基配方和最佳搖瓶發(fā)酵條件進行優(yōu)化。通過單因素篩選法，確定了發(fā)酵培養(yǎng)基配方的最佳碳源為可溶性淀粉

3、、最佳氮源為蛋白胨、最佳金屬鹽離子為氯化錳；運用均勻設(shè)計法，最終確定該菌株產(chǎn)油脂發(fā)酵培養(yǎng)基的最優(yōu)配方為：可溶性淀粉105g/L，蛋白胨1.1 g/L，磷酸二氫鉀1.5 g/L，硫酸銨0.3 g/L，硫酸鎂0.32 g/L，氯化錳4.9 nmol/L。在此基礎(chǔ)上運用單因素法對菌株發(fā)酵條件進行優(yōu)化，最佳搖瓶發(fā)酵條件為：初始pH7.0，溫度26℃，轉(zhuǎn)速190 r/min，裝液量100 mL。在優(yōu)化后的培養(yǎng)基及搖瓶發(fā)酵條件下培養(yǎng)6 d，菌體生長

4、量（干質(zhì)量）高達41.852 g/L，油脂產(chǎn)量達到25.511 g/L。
　　 2.利用氣相色譜-質(zhì)譜法分別測定Macrophomina phaseolina MOD-1在優(yōu)化后的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件下產(chǎn)生油脂的脂肪酸組成。前者檢測出9種脂肪酸成分，其中單不飽和脂肪酸含量為67.92％；后者檢測出7種脂肪酸成分，其中單不飽和脂肪酸含量為74.32％。優(yōu)化后的MOD-1菌株油脂產(chǎn)量升高，組成簡單，易于純化，且單不飽和脂肪酸含量較高。<

5、br>　　 3.以淀粉廠廢水為發(fā)酵基質(zhì)，利用Macrophomina phaseolina MOD-1發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂。研究表明，此菌株能有效利用不外加任何營養(yǎng)物質(zhì)的玉米淀粉廠廢水合成油脂，菌體生長量（干質(zhì)量）達到2.218 g/L，菌絲體中油脂產(chǎn)量為1.005 g/L，油脂含量達到45.33％，COD去除率達到30.68％。通過添加碳源-可溶性淀粉來調(diào)整淀粉廢水培養(yǎng)基中的碳氮比，以達到提高菌株MOD-1菌體油脂產(chǎn)量的目的。在最佳的