湖羊不同泌乳期乳蛋白質組差異的研究.pdf

1、本文用2-DE和iTRAQ對6只湖羊產后1 d、3 d、7 d、14 d、28 d和56 d的脫脂乳和乳清蛋白質組進行了分析，主要結果如下：
　?。?）湖羊不同泌乳時間脫脂乳蛋白質組分析
　　將6只湖羊不同時間點全乳等體積混合，經3,000×g離心獲得脫脂乳，用雙向電泳（2-DE）技術檢測脫脂乳蛋白。在6個時間點的脫脂乳樣中，共檢測出44個差異表達的蛋白點。對比薩爾達綿羊脫脂乳的研究結果，發(fā)現湖羊脫脂乳中蛋白主要包括α-乳白

2、蛋白、β-乳球蛋白、αS1-酪蛋白、αS2-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、白蛋白以及Ig重鏈前體。與1 d相比，3 d、7 d、14 d、28 d和56 d的差異蛋白點數分別為38、35、34、38和36。
　?。?）湖羊不同泌乳時間乳清蛋白質組分析
　　將上述湖羊混合脫脂乳經100,000×g超高速離心，獲得乳清蛋白，利用2-DE結合MALDI TOF/TOF質譜技術進行分離和鑒定。在6個時間點的乳清蛋白樣品中共檢測到4

3、1個差異蛋白點，對應15種蛋白質。其中6種蛋白已收錄在綿羊蛋白組學庫中，分別為κ-酪蛋白、αS1-酪蛋白變異體、叢生蛋白、α-1抗胰蛋白酶、氣道過氧化物酶和驅動樣蛋白；其余9種蛋白已收錄于脊椎動物蛋白數據庫，分別為Igμ鏈、補體 C3、多聚Ig受體亞型x2、IgG重鏈恒定區(qū)四聚體前體、核結合蛋白-1型x1、維生素D結合蛋白、角蛋白、糖基化依賴性細胞粘附分子1和肌動蛋白細胞質2亞型x1。
　　與1 d相比，3 d、7 d、14 d、

4、28 d和56 d的的差異蛋白點數分別為30、29、39、20和31。叢生蛋白在泌乳初期，豐度較高。14 d豐度迅速下降，28 d和56 d豐度降低到0。α-1抗胰蛋白酶豐度在14 d較高，其它時間點豐度較低。氣道過氧化物酶在泌乳初期豐度較高，7 d豐度迅速下降為0，之后上升，在56 d豐度又降為0。驅動樣蛋白僅在7 d和14 d豐度較高，其它時間點豐度較低。補體 C3在1d豐度很高，之后豐度不規(guī)律變化。維生素D結合蛋白在1d、7d、2

5、8d豐度較高，3 d、14 d、56 d豐度較低。糖基化依賴性細胞粘附分子1僅在7 d和14 d時豐度較高。肌動蛋白在1 d豐度較高，其后下降，28 d和56 d降為0。
　?。?）不同泌乳時間點湖羊乳蛋白質組差異
　　用iTRAQ技術分析湖羊不同泌乳期的乳清蛋白，共檢出310個蛋白質。其中有111種蛋白收錄于綿羊數據庫，199種蛋白收錄于脊椎動物數據庫。6個時間點的差異蛋白為121個。熱圖分析表明121個差異蛋白的豐度隨時

6、間變化。與1 d相比，3 d、7 d、14 d、28 d和56 d的差異蛋白數分別為30、42、63、80和85。
　　將蛋白進行GO功能注釋，對6個時間點乳清中差異蛋白進行分類。根據分子功能分為9類，即結構分子活性、轉錄因子活性、抗氧化劑活性、分子轉導活性、結合活性、轉運活性、催化活性、趨化活性和分子調節(jié)功能。產后1d與3d差異蛋白分子功能分類最多；而3d與7d差異蛋白分子功能失去兩類，即轉錄因子活性和抗氧化劑活性；7 d與14

7、 d、14 d與28 d、28 d與56 d差異蛋白分子功能失去4類，即轉錄因子活性、抗氧化劑活性、結構分子活性和趨化活性。
　　根據細胞定位，不同泌乳期差異蛋白分為9類，即細胞器、細胞、胞外區(qū)域、膜封閉腔、神經元突觸、細胞連接、大分子復合物、細胞外基質和膜。1d與3d差異蛋白分類最多。而3d與7d差異蛋白分類缺少神經元突觸。7d與14d差異蛋白分類缺少神經元突觸、細胞連接。14 d與28 d差異蛋白分類最少，但28 d與56 d

8、的差異蛋白分類增多，增加了大分子復合物和膜封閉腔。
　　根據生物途徑，差異蛋白分為17類，即發(fā)展過程、多細胞生物過程、細胞過程、單生物過程、生物附著、代謝過程、定位、細胞組成的組織、免疫系統(tǒng)、信號傳遞、行為反應、刺激應答、生長、轉移、生物調控、多生物過程和節(jié)律過程等。不同泌乳期，乳中差異蛋白在6類生物途徑中表現出較大變化，這些生物途徑分別為行為反應、節(jié)律過程、生長、轉移、生物附著和多生物過程。
　　通過Pathway代謝通路