犢牛直腸菌群多樣性的研究.pdf

1、犢牛腹瀉的高發(fā)病率和高死亡率給整個(gè)規(guī)?；B(yǎng)牛產(chǎn)業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，有報(bào)道稱，超過50％的初生犢牛的死亡都是由腹瀉引起的。目前，國內(nèi)關(guān)于犢牛腹瀉的研究多集中于某個(gè)血清型病原菌的流行病學(xué)的調(diào)查研究或是針對病例爆發(fā)的病原菌的分離鑒定以及治療方面的研究，而對腹瀉發(fā)生時(shí)腸道微生物的多樣性及其變化的研究報(bào)道很少。瘤胃是反芻動物營養(yǎng)代謝中最重要的環(huán)節(jié)，也是研究微生物多樣性的熱點(diǎn)。然而犢牛瘤胃尚未發(fā)育完全，故其腸道微生物菌群在宿主健康和營養(yǎng)中的作用

2、相當(dāng)重要和顯著。開展關(guān)于犢牛腸道微生物多樣性研究，不僅可以比較全面地了解腸道微生物菌群，促進(jìn)腸道微生物資源的開發(fā)和利用，而且還能為初生犢牛動物營養(yǎng)研究以及犢牛腹瀉的發(fā)生提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為更好的預(yù)防和控制犢牛腹瀉有著重要的意義。
　　隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，從分子水平研究環(huán)境微生物的群落結(jié)構(gòu)已經(jīng)成為可能。PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))、RFLP(限制性片段長度多態(tài)性)技術(shù)的建立和16SrRNA測序技術(shù)的不斷完善以及將這些技術(shù)融合而產(chǎn)生一種

3、簡單、快速和有效的微生物多樣性或者群落結(jié)構(gòu)分析方法。與傳統(tǒng)方法相比，它不需要分離培養(yǎng)細(xì)菌，可利用PCR擴(kuò)增環(huán)境樣品中所有細(xì)菌的16SrRNA，包括活菌(可培養(yǎng)和不可培養(yǎng))和未降解的死菌。本論文利用16SrRNA-RFLP(16SrRNArestrictionfragmentlengthpolymorphism)的分子生物學(xué)方法直接對規(guī)?；B(yǎng)殖的2周齡內(nèi)健康和腹瀉犢牛直腸中的細(xì)菌進(jìn)行分類，同時(shí)分析腹瀉前后直腸中細(xì)菌的種群變化情況，探索細(xì)菌

4、種群變化情況與犢牛腹瀉之間的關(guān)系。
　　研究結(jié)果表明：
　　1．從4頭1-2周齡健康犢牛的16SrDNA克隆文庫中隨機(jī)挑選了506個(gè)克隆，通過菌落PCR技術(shù)篩選出488個(gè)陽性克隆，其中共143個(gè)OTUs。在測序得到的14個(gè)克隆的16SrRNA序列中，1條為嵌合序列。經(jīng)過系統(tǒng)學(xué)分析，13條非嵌合序列分屬于以下幾大細(xì)菌類群：梭菌屬(13%)、雙歧桿菌屬(8%)、擬桿菌屬(3%)、真桿菌屬(3%)、普氏菌屬(2%)、埃希菌屬(4%

5、)、巨型球菌屬(5%)和不可培養(yǎng)菌(8%)等，以專性厭氧菌屬為主。
　　2．從4頭2周齡腹瀉犢牛的16SrDNA克隆文庫中隨機(jī)挑選了480個(gè)克隆，通過菌落PCR技術(shù)篩選出474個(gè)陽性克隆，其中共91個(gè)OTUs。在測序得到的12個(gè)克隆的16SrRNA序列中，無嵌合序列。經(jīng)過系統(tǒng)學(xué)分析，12條非嵌合序列分屬于以下幾大細(xì)菌類群：乳桿菌屬(14%)、腸球菌屬(10%)、埃希菌屬(8%)、弧菌(5%)和不可培養(yǎng)菌(20%)等，以需氧兼性厭氧