櫛江珧形態(tài)性狀對(duì)重量性狀的影響及五個(gè)野生群體遺傳多樣性的微衛(wèi)星分析.pdf

1、櫛江珧(Atrina pectinata)在我國沿海分布較廣,經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高。目前關(guān)于櫛江珧的研究較少,主要集中在形態(tài)學(xué)和繁殖生物學(xué),群體遺傳學(xué)和分子生物學(xué)研究相對(duì)較少。本研究以野生櫛江珧?yàn)椴牧?首先探討了櫛江珧形態(tài)性狀對(duì)重量性狀的影響效果,為櫛江珧質(zhì)量性狀的選育提供了一定的理論參考;其次進(jìn)行了微衛(wèi)星多態(tài)性引物的篩選及在我國野生櫛江珧群體的遺傳多樣性分析,豐富了櫛江珧群體遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的研究內(nèi)容。取得的主要結(jié)果如下:
　　1.櫛

2、江珧形態(tài)性狀對(duì)重量性狀的影響:隨機(jī)選取101只山東日照的野生櫛江珧,測量其殼長(SL)、殼寬(SW)、殼高(SH)、殼頂角(AG)4個(gè)形態(tài)性狀和體重(WG)、軟體重(WT)、閉殼肌重(WM)3個(gè)重量性狀,采用相關(guān)分析和通徑分析得出了不同形態(tài)性狀對(duì)重量性狀的影響效果。結(jié)果表明,除殼頂角與閉殼肌重的相關(guān)系數(shù)不顯著外,其余形態(tài)性狀與重量性狀間的相關(guān)系數(shù)均達(dá)極顯著水平(P<0.01);殼高對(duì)重量性狀的直接作用和間接作用均較大,是影響重量性狀的主

3、要因素;殼長和殼寬通過殼長對(duì)重量性狀的間接作用較大,直接作用較小,是影響重量性狀的兩個(gè)次要因素;利用逐步回歸分析建立了櫛江珧形態(tài)性狀關(guān)于體重(Y=69.112SH+52.823SW-751.367)、閉殼肌重(Y=4.275SH-18.610)和軟體重(Y=37.161SH+43.404SW+4.111SA-614.096)的最優(yōu)回歸方程。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為櫛江珧的選擇育種研究提供了一定的理論參考。
　　2.櫛江珧微衛(wèi)星富集文庫的構(gòu)建與多

4、態(tài)性引物的篩選:首先用限制性內(nèi)切酶Msp I對(duì)基因組 DNA進(jìn)行酶切,并將酶切產(chǎn)物與 Msp I接頭(HMA1:5'-GATCATGAGTCCTGCT-3',HMA2:5'-CGAGCAGGACTCAGAA-3')進(jìn)行連接,連接產(chǎn)物與生物素標(biāo)記的寡核苷酸探針(AC)15進(jìn)行雜交,并將雜交產(chǎn)物與包被有鏈霉親和素的磁珠相結(jié)合,對(duì)雜交產(chǎn)物-探針-磁珠的雜交復(fù)合物進(jìn)行洗脫,洗脫得到的微衛(wèi)星序列進(jìn)行 PCR擴(kuò)增后克隆進(jìn) pMD18-T載體中,然后

5、轉(zhuǎn)入到感受態(tài)細(xì)胞中,挑選陽性克隆進(jìn)行測序。對(duì)192個(gè)菌落中的109個(gè)陽性克隆進(jìn)行微衛(wèi)星測序,其中93個(gè)序列測序成功,使用SSR Hunter軟件處理序列得到66個(gè)重復(fù)5次以上的微衛(wèi)星序列,其中完美型51個(gè),占77.3％;不完美型11個(gè),占16.7%;混合型4個(gè),占6.1%。根據(jù)測序結(jié)果共設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物32對(duì),經(jīng)退火溫度和多態(tài)性篩選,有26對(duì)能擴(kuò)增出特異性目的片段,21對(duì)在群體擴(kuò)增中具有多態(tài)性。
　　3.我國5個(gè)地理群體櫛江珧的遺傳

6、多樣性分析:從篩選出的21對(duì)多態(tài)性較強(qiáng)的引物中,選擇產(chǎn)物較好的8對(duì),以5個(gè)櫛江珧野生群體(中國北方:山東蓬萊、文登和日照;中國南方:廣東湛江和海南三亞)共150個(gè)櫛江珧樣本為研究對(duì)象,進(jìn)行了遺傳多樣性分析。8對(duì)微衛(wèi)星引物在5個(gè)地理群體中共檢測到41個(gè)等位基因,平均每對(duì)引物檢測到5.13個(gè),有效等位基因分別為1.6590~6.1205個(gè),平均3.0339個(gè)。5個(gè)櫛江珧地理群體的期望雜合度分別為0.4863、0.5704、0.5512、0.

7、5703、0.5806,雜合度較高;平均多態(tài)信息含量(PIC)為0.4162、0.4869、0.4805、0.4881、0.5017,均達(dá)到高度多態(tài),雜合度和PIC說明5個(gè)群體的櫛江珧遺傳多樣性較高。兩兩群體間遺傳分化指數(shù)(Fst)為0.0292~0.2805,遺傳距離為0.0853~0.5458,北方三個(gè)群體之間遺傳分化較弱,遺傳距離較近,可認(rèn)為是一個(gè)物種的不同地理群體;南方兩個(gè)群體的遺傳距離與Fst也表明其為同一個(gè)物種的兩個(gè)地理群體