Treg細胞在布魯氏菌M5-90弱毒誘導機體免疫應答中的作用.pdf

1、布魯氏菌病(Brucellosis)由布魯氏菌(Bruce1la)侵入機體引起,以流產(chǎn)、不育和弛張熱為臨床特征的人獸共患病。該病在人畜間廣泛流行,世界170個國家和地區(qū)均有該病的發(fā)生,在我國新疆和青海兩省尤為突出,給畜牧業(yè)生產(chǎn)和人類健康帶來了嚴重的危害。布魯氏菌是典型的胞內(nèi)寄生菌,主要以細胞免疫為主,T細胞在其誘導的免疫應答中發(fā)揮著重要作用。CD4+CD25+T細胞(Treg)對免疫應答具有調(diào)節(jié)功能,主要表現(xiàn)為免疫無反應性和免疫抑制性,

2、可以通過下調(diào)機體的免疫應答來維持機體穩(wěn)定和免疫耐受,當Treg細胞數(shù)量低下和功能紊亂可導致多種疾病的發(fā)生。Foxp3(Fork head box p3)是特異性表達在Treg細胞上的一類轉錄因子,Foxp3的活化對Treg細胞發(fā)育和轉化有較大的影響。對Treg細胞的免疫調(diào)控研究將有助于對布魯氏菌免疫機制的理解及防治新策略的制定。目前Treg細胞是否參與了綿羊對布魯氏菌M5-90弱毒的免疫反應調(diào)控尚不清楚,為了探討Treg細胞在布魯氏菌M

3、5-90弱毒疫苗誘導機體免疫應答中的作用,本項目主要開展了以下研究工作:
　　1、外周血CD4+、CD8+T、CD4+CD25+Treg在綿羊接種布魯氏菌M5-90弱毒疫苗后的動態(tài)變化:以布魯氏菌M5-90弱毒間隔10天接種布病陰性綿羊,共接種三次,頸靜脈采血,新鮮血液2小時內(nèi)流式細胞儀測定Treg細胞及T細胞亞群并進行分析;結果顯示CD4+T、CD8+T淋巴細胞均在第20天達到顯著升高水平,前者為40.44％,后者為28.79%

4、,而后均開始降低;Treg細胞自接種后處于上升趨勢,第30天時達到9.07%的最高水平;而CD4+/CD8+則始終保持在1.49的水平。研究結果提示Treg細胞參與了布魯氏菌M5-90弱毒疫苗的免疫應答調(diào)控,Treg細胞的上調(diào)抑制了CD4+T、CD8+T淋巴細胞的增殖,且維持機體Th1/Th2細胞之間反應的平衡;
　　2、綿羊接種布魯氏菌M5-90弱毒疫苗后IL-1β、IL-6及抗體水平檢測研究:分離血清,以虎紅平板凝集試驗和試管

5、凝集試驗相結合的方法進行布魯氏菌抗體水平的測定,在接種的第10天、20天、30天,抗體陽性率均為100%,且一免后即達到陽性,二免時水平最高,三免時略微下降;用ELISA方法檢測了IL-1β、IL-6的變化,發(fā)現(xiàn)IL-1β總體呈緩慢升高趨勢,三免時達到顯著水平,IL-6則緩慢下降,但各階段變化均不顯著;布魯氏菌抗體水平及IL-1β、IL-6等細胞因子的變化提示Treg細胞參與了布魯氏菌M5-90弱毒疫苗誘導的體液免疫和細胞免疫應答過程,

6、且IL-1β可能起到促進Treg細胞擴增的作用;
　　3、綿羊接種M5-90后Treg細胞中Foxp3基因表達的檢測研究:分離淋巴細胞,提取RNA,根據(jù)GenBank上的綿羊Foxp3基因mRNA序列和內(nèi)參基因序列分別設計引物,采用realtimeRT-PCR技術分析Foxp3基因的表達情況。結果Foxp3基因表達隨著免疫次數(shù)的增加呈升高趨勢,第30天時相對表達量達到高峰;提示其促進了Treg細胞的發(fā)育與轉化并協(xié)助Treg細胞發(fā)揮