玉米葉序調(diào)控相關(guān)基因Zmedp的克隆及功能研究.pdf

1、對生葉序玉米是一個新的變異類型，其特征是在莖稈的同一節(jié)點(diǎn)生長兩片對生葉片，是發(fā)育生物學(xué)研究的重要遺傳資源。本研究以三組對生玉米、互生玉米近等基因系為材料，通過基因芯片的方法尋找并得到可能是調(diào)控葉序發(fā)生的候選基因，我們將其命名為ZMedp。通過ZMedp過量表達(dá)載體和干涉表達(dá)載體進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，并采用ELISA的方法比較野生植株和ZMedp轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行細(xì)胞分裂素和生長素的含量，同時分析了水稻同源基因Osedp，獲得了如下結(jié)果：
　　

2、 1、通過RT-PCR獲得ZMedp的全長，并構(gòu)建了過量表達(dá)載體和干涉表達(dá)載體。通過原位轉(zhuǎn)化獲得了ZMedp的過表達(dá)轉(zhuǎn)基因玉米和干涉表達(dá)轉(zhuǎn)基因玉米植株，通過PCR篩選出干涉轉(zhuǎn)基因植株。
　　 2、通過半定量的方法，我們對ZMedp進(jìn)行組織特異性表達(dá)分析。結(jié)果顯示ZMedp基因在根、莖、葉以及莖尖均有表達(dá)；在莖尖表達(dá)最強(qiáng)烈，其次是根，再次是莖，在葉片中表達(dá)量最少。
　　 3、構(gòu)建了p1302-ZMedp-mGFP融合表達(dá)載

3、體，并通過基因槍法轟擊洋蔥表皮細(xì)胞，進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析，結(jié)果顯示ZMedp與GFP載體的融合蛋白定位于細(xì)胞核中。
　　 4、采用ELISA的方法比較對照玉米植株和轉(zhuǎn)基因玉米植株中細(xì)胞分裂素和生長素的含量差異，結(jié)果表明：在轉(zhuǎn)基因干涉植株中細(xì)胞分裂素含量降低，而生長素含量升高。這說明ZMedp對細(xì)胞分裂素和生長素的合成有作用，在玉米的研究中尚未有過對該基因的報(bào)道，是一個新的調(diào)控內(nèi)源激素的基因。
　　 5、通過NCBI找到ZM