本生煙NbRab8家族基因的分離及功能分析.pdf

1、Rab蛋白是小G蛋白最主要的成員之一，在小泡運輸中起重要的作用。Rab8主要調(diào)控高爾基體-質(zhì)膜的囊泡運輸。目前，在動物中Rab8蛋白的研究成果較多，其分子水平的作用機理研究較為透徹，而植物中Rab8的研究成果相對較少。本研究對本生煙草柱頭表面富集表達的NbRab8家族的基因進行了分離，并采用VIGS技術(shù)對其功能進行了研究。
　　 NbRab8家族有六個成員，分別命名為NbRab8-1～NbRab8-6，該家族基因的cDNA全長為

2、651bp，編碼217個氨基酸殘基。氨基酸序列分析表明，NbRab8-1～NbRab8-6序列同源性非常高，并且都具有小G蛋白家族成員具有的幾個保守結(jié)構(gòu)特征。系統(tǒng)進化樹分析表明，NbRab8家族與擬南芥RabE家族親緣關(guān)系較近。實時定量PCR分析結(jié)果顯示NbRab8-1～NbRab8-6在植物組織中廣泛表達，尤其在葉片中表達量較高。亞細胞定位結(jié)果顯示，NbRab8-1～NbRab8-6定位于細胞膜和高爾基體。NbRab8沉默植株矮小、頂

3、端優(yōu)勢消失、側(cè)枝生長較旺盛、葉片變小、卷曲且有早衰現(xiàn)象。根系不發(fā)達，其主根長度進僅為對照的五分之一。生活周期縮短，為對照的一半左右。沉默植株花器官小且發(fā)育異常，花瓣始終不開放直至萎縮，雄蕊完全敗育，雌蕊短小，TRV：0的花粉不能在沉默植株柱頭上正常萌發(fā)，表明沉默植株的柱頭在發(fā)育過程中存在缺陷。
　　 根據(jù)以上研究結(jié)果，NbRab8家族蛋白可能在植物的生長發(fā)育過程中起到關(guān)鍵的作用，本研究為Rab8家族基因的功能研究提供了新的實驗支