泰山槐花多糖的提取及對雞兔免疫增強(qiáng)作用的研究.pdf

1、槐花(RobiniaPseudoacaciaL.)為豆科蝶形花亞科刺槐屬多年生落葉槐樹所盛開的鮮花?；被ㄊ驾d于《貴州民間方藥集》：“止大腸下血，咯血，又治婦女紅崩”。槐花含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、微量元素和維生素等物質(zhì)，具有消痛化淤，清熱解毒，療咽治痔，健胃通腸等功效，主治咯血、大腸下血、崩漏，具有較高的藥用價值。畜禽傳染病嚴(yán)重危害畜牧產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，尤其是病毒性傳染病，迄今尚無有效的治療方法，疫苗預(yù)防仍是最重要的措施。由于各種原因，多

2、數(shù)疫苗只有與免疫增強(qiáng)劑配合使用才具有良好的免疫效果。但是，目前國內(nèi)外廣泛使用的油乳類、鋁膠類化學(xué)免疫增強(qiáng)劑副作用大，急需研制高效、低毒的新型免疫增強(qiáng)劑。目前已經(jīng)證實多種中藥多糖具有免疫增強(qiáng)作用，但關(guān)于槐花多糖的研究國內(nèi)鮮有報道。本課題組采集泰山的新鮮槐花，烘干粉碎后用纖維素酶法提取粗多糖，并通過正交試驗確定了酶解的最佳條件，用Sevage試劑除蛋白，保證了粗多糖較高的純度。選取健康清潔的雛雞和家兔為動物模型，研究槐花多糖的免疫增強(qiáng)作用，

3、為開發(fā)新型免疫增強(qiáng)劑提供試驗依據(jù)。
　　 1.泰山槐花多糖的提取及測定
　　 探討纖維素酶法提取槐花多糖的工藝條件。采用正交試驗設(shè)計研究了提取溫度、pH、酶用量和料液比等因素對槐花多糖提取率的影響，用Sevage法脫除槐花多糖所含的蛋白。結(jié)果，酶法提取槐花多糖的工藝條件為：料液比1:25，溫度45℃，pH4.5，酶用量1.00％。該工藝下槐花多糖的得率為4.93％，多糖含量為76.4％。
　　 2.泰山槐花多糖對

4、雛雞免疫增強(qiáng)作用的研究
　　 目的是為了研究槐花多糖對雛雞的免疫調(diào)節(jié)作用。本研究選取240只健康雛雞在免疫新城疫滅活苗前將不同劑量的槐花多糖溶液皮下注入雛雞體內(nèi)，以生理鹽水作對照。在免疫后7d，取脾臟、胸腺、法氏囊檢測免疫器官指數(shù)。各組分別在免疫后3、7、14、21d采血，用β-微量法HA與HI檢測血清抗體效價，全自動血細(xì)胞分析儀測定外周血白細(xì)胞數(shù)和淋巴細(xì)胞比率，ELISA方法檢測小腸內(nèi)SIgA的含量。結(jié)果顯示：槐花多糖可促進(jìn)雛

5、雞免疫器官的發(fā)育，增加外周血白細(xì)胞的數(shù)目和淋巴細(xì)胞比率，提高新城疫抗體效價，促進(jìn)十二指腸內(nèi)SIgA的分泌，200mg/ml劑量組多糖效果顯著。結(jié)論，槐花多糖具有的免疫增強(qiáng)活性，有望開發(fā)為新型免疫增強(qiáng)劑。
　　 3.泰山槐花多糖對兔出血癥病毒免疫原性的增強(qiáng)作用
　　 為了研究槐花多糖對兔出血癥病毒(rabbitvirdhemorrhagicdiseasevirus，RHDV)的免疫增強(qiáng)作用。在兔出血癥組織滅活疫苗中加入不同

6、劑量的槐花多糖，制備成兔出血癥槐花多糖滅活苗。選取體重1kg左右的健康獺兔84只，隨機(jī)分為7組，其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組為槐花多糖疫苗組，Ⅳ組為蜂膠疫苗對照組，Ⅴ組為無多糖疫苗對照組，Ⅵ組和Ⅶ組分別為飼喂組和空白對照組，各組分別在免疫后0、3、7、14、21、28、35、42d采血，用β-微量法HA與HI檢測血清抗體效價，全自動血細(xì)胞分析儀測定外周血淋巴細(xì)胞數(shù)和淋巴細(xì)胞比率，試劑盒檢測血清中IL-2的含量。結(jié)果顯示：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組各指標(biāo)均高于