高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒GD株不同代次毒株的體內(nèi)特性研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)自上世紀八十年代被發(fā)現(xiàn)以來，作為危害全球養(yǎng)豬業(yè)的主要病原已有二十余年歷史了。2006年中國大陸以及鄰國越南的養(yǎng)豬業(yè)遭遇了高致病性PRRSV(Highly Pathogenic PRRSV，即Nsp2基因存在不連續(xù)的30個氨基酸缺失的毒株)的嚴重侵害，造成了巨大的經(jīng)濟損失。為了對抗HP-PRRSV的感

2、染，中國獸醫(yī)界開展了各類防治HP-PRRSV的疫苗研究。本實驗室也針對此開展了PRRSV弱毒苗的研制工作。
　　 為了評估本實驗室分離的HP-PRRSV GD株的致弱效果，將HP-PRRSV GD株及其致弱株GDr180株分別接種30頭40日齡的SPF仔豬，從接種前1周開始密切觀察各組動物的體溫變化及臨床表現(xiàn)，于接種后第3、7、14、21、28和35天分別剖殺各組豬只，觀察其剖檢病理變化，采取心、肝、脾、肺、腎、氣管、扁桃體、頜

3、下淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)、腹股溝淋巴結(jié)、卵巢/睪丸、十二指腸、膀胱、肌肉和腦組織及肺灌洗液共17種樣品，一式兩份，一份組織樣品使用熒光定量PCR進行抗原定量檢測，另一份組織用以制備病理切片后進行HE染色以觀察光鏡下顯微病理變化，同時使用免疫組化染色以檢測抗原的動態(tài)分布。
　　 結(jié)果顯示，接種后臨床觀察GD組豬只體溫明顯升高，出現(xiàn)精神沉郁、食欲下降、呼吸困難和皮膚發(fā)紅，及神經(jīng)癥狀等；GDr180組與對照組的仔豬均體溫正常且精神狀態(tài)良

4、好。其次，GD組仔豬3-21dpi剖檢病理變化顯著，肺臟表面大面積出血、淤血，尖葉與心葉出現(xiàn)實變，頜下淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)和腹股溝淋巴結(jié)腫大與出血，被膜下有灰紅色或灰白色大理石樣外觀，脾臟前段邊緣有暗紅色梗死灶，心臟、腎臟表面、氣管黏膜及膀胱內(nèi)黏膜有針尖樣出血點，腦組織出現(xiàn)輕度出血以及淤血，而在28dpi和35dpi，只有肺臟、頜下淋巴結(jié)和腹股溝淋巴結(jié)表現(xiàn)出輕度腫大，其他組織器官無明顯變化；GDr180組僅在7dpi有一頭仔豬的肺臟輕度

5、水腫，其它時間段各豬只的組織器官均無明顯異常；對照組仔豬剖檢均未見明顯病理變化。最后，光鏡下顯微病理變化顯示，GD組表現(xiàn)出典型的間質(zhì)性肺炎與非化膿性腦炎，淋巴結(jié)中淋巴濾泡較多，多量含鐵血黃色沉著，伴有不同程度的單核細胞浸潤，脾臟白髓淋巴細胞明顯壞死減少，氣管和十二指腸的粘膜上皮都出現(xiàn)脫落，腦組織表現(xiàn)膠質(zhì)細胞增生，肌肉纖維呈彎曲變性狀態(tài)；而GDr180組僅在7dpi有一頭仔豬的肺臟表現(xiàn)輕度的巨噬細胞與間質(zhì)增生，其它時間段各豬只的組織器官均

6、結(jié)構(gòu)正常無病理變化；對照組的各組織樣品都顯示結(jié)構(gòu)正常。
　　 對免疫組化染色結(jié)果和熒光定量PCR檢測結(jié)果進行分析后發(fā)現(xiàn)，GD組各組織樣品中的陽性細胞與病毒載量在3～35dpi的試驗周期內(nèi)明顯高于GDr180組，比較明顯的差異都出現(xiàn)在7～14dpi，兩組的組織樣品中的陽性細胞數(shù)量與病毒載量幾乎都在7dpi左右達到峰值，之后都表現(xiàn)為逐漸的降低或持續(xù)維持較低的陽性細胞數(shù)量或病毒載量水平。GD株在SPF仔豬體內(nèi)各組織樣品廣泛分布且持續(xù)存

7、在時間較長，GDr180株在仔豬體內(nèi)分布相對較少且增殖速度較慢，并在試驗后期呈現(xiàn)極低水平的持續(xù)存在，免疫組化染色結(jié)果顯示GD株與GDr180株在仔豬體內(nèi)都是主要存在于各組織器官的上皮細胞與巨噬細胞，對照組的組織切片經(jīng)免疫組化染色顯示無陽性細胞存在，熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示無PRRSV核酸存在于各組織樣品中。
　　 綜上所述，HP-PRRSV GD株接種SPF仔豬后引發(fā)了典型的HP-PRRSV病理特征，致弱毒株GDr180株接種