一粒小麥籽粒硬度基因Pinam,Pinbm,Gspm相關(guān)載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、籽粒硬度對谷物的加工品質(zhì)具有重要影響，在眾多的小麥族植物(尤其是小麥)中，籽粒的硬度性狀主要由5D短臂上的Hardness(Ha)位點的兩個主效基因，即Puroindolineα(Pina-Dl)和Puroindolineb(Pinb-Dl)控制，同時受基因GrainSoftnessProtein-1(Gsp-1)的影響。這三個基因所表達(dá)的蛋白(friabilin)分散在小麥胚乳內(nèi)，它與淀粉粒表面的脂質(zhì)相互作用影響著籽粒的硬度。本研究以

2、一粒小麥(T.monococcum)DV92作為Pinam、Pinbm和Gspm基因的供體，構(gòu)建了相關(guān)的表達(dá)載體5個；誘導(dǎo)普通小麥品種“科農(nóng)199”成熟胚愈傷16909個和幼胚愈傷11081個用于基因槍介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化；經(jīng)Biolaphos(化學(xué)除草劑)篩選獲得抗性植株；再經(jīng)PCR檢測獲得陽性植株。主要研究結(jié)果如下：
　　 (1)相關(guān)表達(dá)載體的構(gòu)建：以一粒小麥DV92基因組DNA為模板，用pGEM構(gòu)建完成了單基因表達(dá)載體pGEM-

3、pinam、pGEM-pinbm、pGEM-gspm；兩基因串聯(lián)表達(dá)載體pGEM-pinam-pinbm；以及三基因串聯(lián)表達(dá)載體pGEM-Pinam-Pinbm-Gspm。
　　 (2)遺傳轉(zhuǎn)化：通過組織培養(yǎng)獲得“科農(nóng)199”成熟胚愈傷16909個，其中13199個愈傷用于基因槍轟擊轉(zhuǎn)化兩基因串聯(lián)表達(dá)載體pGEM-pinam-pinbm；幼胚愈傷10130個，其中4522個愈傷基因槍轟擊轉(zhuǎn)化兩基因串聯(lián)表達(dá)載體pGEM-pinam

4、-pinbm，5608個愈傷基因槍轟擊轉(zhuǎn)化三基因串聯(lián)表達(dá)載體pGEM-Pinam-Pinbm-Gspm。
　　 (3)抗性篩選：基因槍轟擊的5608個小麥幼胚愈傷，經(jīng)Biolaphos(化學(xué)除草劑)抗性篩選，最終獲得933株再生植株(本研究只對后期所培養(yǎng)的部分幼胚分化所得抗性苗進行了檢測)。
　　 (4)PCR檢測：再生植株中鑒定出11株陽性植株，有關(guān)轉(zhuǎn)基因植株的籽粒硬度還需進一步實驗驗證。
　　 本研究將Pin