芳基-N-甲基氨基甲酸酯類殺蟲劑多殘留免疫檢測方法的建立與應用.pdf

1、本研究以苯酚、雙光氣和6-氨基正己酸為原料合成了半抗原6-(苯氧基羰基)氨基-1-己酸(HA);以3-甲基苯酚、雙光氣和3-氨基丙酸為原料合成了半抗原B-(間-甲基苯氧基羰基)氨基丙酸(HB)。HA用活潑酯法與牛血清白蛋白(BSA)偶聯得到通用免疫原HA-BSA,結合比為42:1;HA和HB用活潑酯法分別與卵清蛋白(OVA)偶聯得到包被抗原HA-OVA和HB-OVA,結合比依次為23:1和17:1。 以芳基-N-甲基氨基甲酸酯類

2、殺蟲劑通用免疫原HA-BSA免疫BALB/c小鼠,經多次免疫后檢測小鼠血清效價并選擇效價較高的小鼠,應用雜交瘤技術,用PEG法將其脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞SP2/0進行融合,經ELISA法篩選及有限稀釋法亞克隆化,建立可穩(wěn)定分泌抗芳基-N-甲基氨基甲酸酯類殺蟲劑的雜交瘤細胞株。結果獲得了三株可穩(wěn)定分泌抗芳香類氨基甲酸酯農藥的雜交瘤細胞株(20-G8、3-E2和23-E5),所分泌的抗體均為IgM、κ型,親和常數分別達2.15×108L/m

3、ol,1.43×108L/mol和8.04×107L/mol。其中細胞株20-G8所分泌的抗體對混滅威、滅除成、滅殺成、甲萘威等芳基-N-甲基氨基甲酸酯類殺蟲劑具有明顯的識別作用,為建立該類農藥的多殘留分析奠定了基礎。 以成功制備的雜交瘤細胞株20-G8所分泌的抗芳基-N-甲基氨基甲酸酯類殺蟲劑單克隆抗體為基礎,通過對檢測體系中鹽離子強度、pH值、有機溶劑等影響因子的研究建立了混滅威、滅除威、滅殺威以及甲萘威的ELISA檢測體系

4、.以Logit(B/B0)作縱坐標與農藥濃度的對數值作橫坐標建立標準曲線,混滅威在0.001μg/L～100μg/L,范圍內呈顯著線性關系,檢測方程為y=-0.9573x-0.3176,相關系數R2達0.9943,在自來水,土壤以及青菜中的添加回收率分別為101.6％、87.7％和90.4％；滅除威在0.001μg/L～100μg/L范圍內呈顯著線性關系,檢測方程為y=-0.9185x-0.1698,相關系數R2達0.9954,在自來水

5、、土壤以及青菜中的添加回收率分別為108.8％、84.6％和92.2％；滅殺威在0.01μg/L～100μg/L范圍內呈顯著線性關系,檢測方程為y=-0.9647x+0.0305,相關系數R2達0.9944,在自來水、土壤以及青菜中的添加回收率分別為97.2％、84.2％和90.9％；甲萘威在0.01μg/ml～100μg/ml范圍內呈顯著線性關系,檢測方程為y=-0.9094x-0.2513,相關系數R2達0.9955,在自來水、土壤