家蠶氨肽酶N基因和堿性磷酸酶基因在中腸組織的表達(dá)分析.pdf

1、蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)產(chǎn)生的伴胞晶體(Cry毒素)是一類在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上用于害蟲防治的重要生物殺蟲劑,被廣泛使用。而家蠶對Bt敏感,所以在蠶區(qū)經(jīng)常發(fā)生生物農(nóng)藥(Bt)中毒事件,一方面造成蠶桑生產(chǎn)巨大損失,另一方面又限制了生物農(nóng)藥的推廣使用,要處理好蠶桑生產(chǎn)與農(nóng)作物害蟲防治的關(guān)系,最佳的解決途徑之一就是培育抗Bt的家蠶品種。
　　氨肽酶N(Aminopeptidase N,APN)是已知的鱗

2、翅目昆蟲抗Bt-Cry重要受體蛋白,堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)也被認(rèn)為是Bt毒素的受體。迄今有關(guān)昆蟲體內(nèi)APN和ALP參與抗Bt的作用機(jī)制的報(bào)道多見于對棉鈴蟲(helicoverpa)、小菜蛾(Plutella xylostella)、煙芽夜蛾(Heliothis virescens)等昆蟲的研究。棉鈴蟲中腸組織上的APN和Cry毒素發(fā)生結(jié)合,且HaAPN基因的突變和棉鈴蟲對Cry毒素抗性的形成有密切

3、關(guān)系。目前在家蠶(Bombyx mori)中抗Bt的研究報(bào)道很少,對家蠶APN和ALP抗Bt作用的機(jī)制以及與Bt-Cry毒素如何結(jié)合等尚未清晰。
　　本實(shí)驗(yàn)選擇家蠶二化性品系(p50、qiufeng、rizhao、306、5124)和多化性品系(7001、7018、7025、7026、7027)為材料,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-Time PCR)技術(shù)檢測了家蠶不同品種五齡起蠶中腸組織的APN基因家族(APN1、APN2、A

4、PN3、APN4、APN5)和ALP基因的表達(dá)差異,以及在同一家蠶品系中腸組織內(nèi)各基因的表達(dá)豐度。結(jié)果顯示:
　　(1)在供試家蠶品系內(nèi)均檢測到APN基因家族各成員和ALP基因的表達(dá),說明APN和ALP基因普遍存在于家蠶品系中;
　　(2)家蠶不同品系A(chǔ)PN的表達(dá)水平存在差異,二化性品系和多化性品系間的表達(dá)水平存在顯著性差異,而同一化性間差異較小;
　　(3)在同一家蠶品系內(nèi)APN家族中的APN2、APN4、APN5表

5、達(dá)量較高,而APN1及APN3基因表達(dá)水平較低,表明APN2、APN4、APN5是家蠶APN基因家族的主要成分;
　　(4)和APN基因家族各成員相比,ALP基因在家蠶各品系內(nèi)表達(dá)量普遍較高,在不同化性品系間的表達(dá)存在差異,其中在品系7001表達(dá)量最高,306品系的表達(dá)量最低;
　　(5)APN、ALP均在品系306內(nèi)表達(dá)量最低,推測APN和ALP基因的表達(dá)水平與家蠶品系的抗病性有關(guān)。
　　本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果將有助于進(jìn)一步