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1、持續(xù)性冷應(yīng)激通過(guò)復(fù)雜的生理生化途徑嚴(yán)重影響家禽的生長(zhǎng)發(fā)育和生產(chǎn)性能的發(fā)揮,增強(qiáng)雞的抗冷應(yīng)激能力是培育抗逆性品種的重要育種性狀之一。本研究以6周齡淮南麻黃雞公雞為試驗(yàn)動(dòng)物,取其肝臟組織體外培養(yǎng)細(xì)胞,經(jīng)核因子E2相關(guān)因子2(Nuclear factor erythroid-2p45-related factor 2,Nrf2)的抑制劑——Kelch樣ECH相關(guān)蛋1(Kelch-like ECH-associated protein 1,KE
2、AP1)處理后,利用染色質(zhì)免疫共沉淀結(jié)合深度測(cè)序(Chromatin immunoprecipitation sequence,CHIP-Seq)和免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,CoIP)新技術(shù),探討在持續(xù)低溫脅迫下,其肝臟細(xì)胞Nrf2抗氧化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)反應(yīng)路徑。結(jié)果如下:
1.通過(guò)灌流雞的肝臟組織獲得的雞肝臟細(xì)胞,運(yùn)用貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)于10cm培養(yǎng)皿,生長(zhǎng)至80%左右,細(xì)胞呈現(xiàn)扁平多邊形。
2
3、.CHIP-Seq獲得的富集DNA與雞全基因組序列比對(duì),測(cè)序片段廣泛分布于1、2、3、4、w和z染色體上,序列經(jīng)基序分析獲得12bp的轉(zhuǎn)錄區(qū)結(jié)合位點(diǎn)。
3.CHIP-Seq測(cè)序結(jié)果與雞全基因組序列比對(duì),其可能相關(guān)基因經(jīng)GO富集分析和KEGG Pathway分析,獲得具有多個(gè)功能和存在于多條通路的基因,其中在抗氧化應(yīng)激通路上的相關(guān)基因主要有VAT1L、TYRP1、TPH2、KCNAB1、HAAO、EFCBP1、DHRS11、CY
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