三角褐指藻生物學特性比較研究及轉基因初步探索.pdf

1、三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)是一種海洋真核單細胞硅藻，是海洋生態(tài)系統(tǒng)中一種非常重要的初級生產者。三角褐指藻總脂含量很高，是一種很有潛力的能源微藻。三角褐指藻來源廣泛，形態(tài)多樣，不同生境來源的藻株其生長狀態(tài)和生理特性不盡相同，即使將其培養(yǎng)在相同的環(huán)境中，生長狀態(tài)和生理特性也會存在差異。三角褐指藻富含多種有價值的不飽和脂肪酸，通過基因工程的手段可以進一步提高它們的含量。Δ6-去飽和酶是脂肪酸合成過程中的關

2、建酶。本論文以三角褐指藻為研究對象，對不同藻株的形態(tài)特征及生物學特性進行了比較研究，并對其中一株藻進行了轉基因的初步探索，轉基因的對象是Δ6-去飽和酶基因。
　　本實驗由兩部分組成。
　　第一部分:10株不同來源三角褐指藻生物學特性的比較研究。對選取的10株藻進行了形態(tài)學和分子鑒定，并繪制了它們的生長曲線，測定了它們的生長速率和總脂含量。結果表明：10株藻在顯微鏡下都呈梭形或卵圓形，黃褐色，將rbcL序列進行對比，這10株藻

3、的rbcL序列幾乎完全相同，它們的生長曲線、生長速率和總脂含量有所差異，有些藻株之間的差異顯著。
　　第二部分:三角褐指藻轉基因系統(tǒng)的初步研究。首先，從三角褐指藻中克隆得到Δ6脂肪酸去飽和酶基因，在釀酒酵母真核表達體系中對其功能進行驗證。結果顯示，該基因所編碼的蛋白質能夠將AA和ALA分別轉化為GLA和SDA，說明克隆得到的基因即為Δ6-脂肪酸去飽和酶基因；然后成功構建了表達質粒pPhaD6，并用基因槍法將其轉入三角褐指藻，獲得了