抵抗素對(duì)肝細(xì)胞SIRT1功能調(diào)控研究.pdf

1、抵抗素(Resistin)是一個(gè)哺乳動(dòng)物中應(yīng)答于營(yíng)養(yǎng)與能量變化的激素，在動(dòng)物饑餓或禁食的情況下表達(dá)量下調(diào)，在飽食或高熱量食物飼喂的情況下上調(diào)表達(dá)。研究人員于2001年首次在小鼠脂肪細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)并克隆了抵抗素，并認(rèn)為這個(gè)新發(fā)現(xiàn)的因子是聯(lián)系哺乳動(dòng)物肥胖與二型糖尿病的紐帶。后續(xù)的研究表明人抵抗素可以引起胰島素靶細(xì)胞如肝細(xì)胞的胰島素抵抗，并廣泛參與到人類與炎癥相關(guān)的各種疾病中。
　　Sir2(Silent information regul

2、ator 2)是酵母中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)應(yīng)答于熱量限制(Calorie restriction)并在熱量限制中介導(dǎo)酵母生命延長(zhǎng)的一個(gè)基因，當(dāng)在酵母中超表達(dá)sir2后，即便不進(jìn)行熱量限制酵母的壽命也能得到延長(zhǎng)。它在哺乳動(dòng)物中有7個(gè)同源基因(Sirtuins family)，分別被命名為SIRT1-SIRT7，研究最多的是SIRT1。與酵母中同源基因一樣，SIRT1也是一個(gè)應(yīng)答于熱量限制的基因，在動(dòng)物饑餓或禁食的情況下表達(dá)量上調(diào)，在飽食或高脂飲食飼

3、喂的情況下被下調(diào)表達(dá)。用SIRT1的激活劑SRT1720飼喂高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠可以顯著的延長(zhǎng)這些肥胖小鼠的壽命，反映了SIRT1在保護(hù)機(jī)體應(yīng)對(duì)年齡相關(guān)疾病中的重要作用。
　　鑒于Resistin與SIRT1在應(yīng)答于營(yíng)養(yǎng)與能量變化時(shí)呈現(xiàn)出的相反的表達(dá)模式，以及它們?cè)谝葝u素抵抗和炎癥中所起到的相反的作用，本研究以肝細(xì)胞為模型，采用熒光定量PCR、western blot、免疫共沉淀、鄰位連接分析、染色質(zhì)免疫共沉淀、ELIAS與細(xì)胞

4、衰老染色等技術(shù)系統(tǒng)地研究了Resistin對(duì)SIRT1表達(dá)與功能的影響，得到以下結(jié)果:
　　在人肝癌細(xì)胞系HepG2中，抵抗素重組蛋白以劑量依賴的形式下調(diào)SIRT1的mRNA與蛋白表達(dá)水平，并且下調(diào)SIRT1的重要輔助蛋白Nampt，以及2個(gè)SIRT1相互作用蛋白PGC-1α和PPARα的表達(dá)。同時(shí)，抵抗素處理減弱了SIRT1與PGC-1α和PPARα的相互作用程度，并下調(diào)了SIRT1-PGC-1α-PPARα轉(zhuǎn)錄復(fù)合物靶基因FG

5、F21與CPT-1α的表達(dá)。表明抵抗素至少通過削弱SIRT1與其相互作用蛋白間的互作來?yè)p傷SIRT1的功能。
　　在小鼠原代肝細(xì)胞中，抵抗素重組蛋白顯著下調(diào)SIRT1 mRNA與蛋白的表達(dá)。并顯著上調(diào)SIRT1負(fù)調(diào)控靶基因Farp2與Pisd的表達(dá);抵抗素處理引起了SIRT1對(duì)其靶基因Farp2啟動(dòng)子結(jié)合能力的減弱。同時(shí)，抵抗素處理引起了SIRT1與其靶DNA序列（主要衛(wèi)星重復(fù)序列）結(jié)合能力減弱。60周齡與10周齡小鼠相比，內(nèi)臟脂

6、肪組織抵抗素mRNA水平有顯著上調(diào)，血清中抵抗素蛋白水平有上升趨勢(shì)。抵抗素至少通過減弱SIRT1與其相互作用DNA的互作來?yè)p傷SIRT1的功能。
　　72h抵抗素處理顯著增加小鼠原代肝細(xì)胞衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性率，SIRT1激活劑白藜蘆醇與煙酰胺單核苷酸可以消除由抵抗素造成的細(xì)胞衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性率上升。
　　在小鼠巨噬細(xì)胞系A(chǔ)na-1中，高濃度葡萄糖與棕櫚酸處理可以顯著上調(diào)抵抗素mRNA表達(dá)水平。高濃度