石蠶st突變體近等基因系與其回交親本的蛋白質(zhì)組學(xué)差異分析.pdf

1、家蠶(Bombyxmori)在我國(guó)已有五千多年的飼養(yǎng)歷史,有著重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。它不僅是鱗翅目昆蟲的典型代表,同時(shí)也是重要的模式生物。隨著家蠶基因組測(cè)序的完成,國(guó)內(nèi)外的研究重點(diǎn)將逐漸轉(zhuǎn)向功能基因組的研究。而蛋白質(zhì)是基因功能的實(shí)施者,是生命過程及現(xiàn)象的直接體現(xiàn)者,沒有對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行深入的分析,就無法了解到生物學(xué)問題發(fā)生的本質(zhì)。
　　新突變是遺傳學(xué)研究的重要對(duì)象,也是功能基因研究的主要材料,遺傳學(xué)發(fā)展的眾多成果取得都得益于對(duì)突變基因的研究

2、。家蠶有四百多種突變品種,石蠶st是其中比較典型的體型突變之一。其最主要的特征就是表皮緊繃,身體硬實(shí),各環(huán)節(jié)后緣腫脹,且這種性狀在5齡盛食期至上簇前表現(xiàn)尤為明顯。
　　目前雙向凝膠電泳技術(shù)聯(lián)合質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中應(yīng)用最為廣泛的分析方法,這恰好為突變材料的研究提供了良好的機(jī)會(huì),利用其原理簡(jiǎn)單,操作便捷的研究特點(diǎn),通過比較突變蠶體與正常蠶體的組織樣品,可以找出與突變基因功能相關(guān)的關(guān)鍵蛋白,充分地闡明突變基因的遺傳基礎(chǔ),擴(kuò)大研究利

3、用。
　　本文首先以家蠶C108為回交親本構(gòu)建了石蠶st近等基因系C8,通過研究C8與C108的差異性來反應(yīng)石蠶st突變體與野生型差異。比較C8與C108表皮的幾丁質(zhì)含量,發(fā)現(xiàn)C8表皮組織中幾丁質(zhì)含量比C108中稍低,但差異并不顯著,幾丁質(zhì)含量與這種突變性狀的形成關(guān)系還需進(jìn)一步研究。其次本文運(yùn)用蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)比較分析了C8與C108的表皮組織、中腸組織、脂肪體組織的蛋白質(zhì)構(gòu)成差異,利用軟件分析挑選了39個(gè)蛋白進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解

4、吸飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS),成功鑒定31個(gè)蛋白,其中以酶類蛋白為主,還包括結(jié)構(gòu)蛋白、轉(zhuǎn)錄因子、熱激蛋白、糖蛋白、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等等,另外還鑒定到5個(gè)功能未知蛋白。
　　為了對(duì)雙向電泳結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,本文從已鑒定到的差異蛋白中挑選GSTd2、GSTs1、Pglym、Tpi、Pdi5個(gè)酶類蛋白基因,以家蠶RpS3基因?yàn)閮?nèi)參,利用Real-timePCR分析這5個(gè)酶類基因在C8與C108的5齡第5天幼蟲表皮中的相對(duì)表達(dá)水平,結(jié)果