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1、miRNA是一類內(nèi)源非編碼的長(zhǎng)度為20-25nt的單鏈小分子RNA,其在植物體內(nèi)主要通過(guò)剪切mRNA對(duì)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,進(jìn)而對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育和響應(yīng)各種逆境脅迫過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,因而有關(guān)miRNA的調(diào)控作用正成為關(guān)注熱點(diǎn)。然而miRNA在植物對(duì)害蟲取食誘導(dǎo)防御機(jī)制中的調(diào)控研究甚少,同時(shí)也很少有茶樹中的miRNA序列被報(bào)道。因此本論文借助小RNA深度測(cè)序、miRNA芯片和qRT-PCR等技術(shù),并結(jié)合生物信息學(xué)分析手段,對(duì)茶樹miRNA進(jìn)
2、行分離鑒定,在此基礎(chǔ)上獲得茶樹被茶尺蠖取食誘導(dǎo)相關(guān)的差異miRNA,以進(jìn)一步明確茶樹miRNA特征及其被茶尺蠖取食誘導(dǎo)的差異miRNA種類與功能。論文獲得的主要結(jié)果如下:
(1)對(duì)茶樹葉片的小RNA進(jìn)行Solexa高通量測(cè)序,共獲得有效序列8,796,700條,占總讀數(shù)的比例高達(dá)81.30%,對(duì)其進(jìn)行miRNA序列分析發(fā)現(xiàn),高拷貝讀數(shù)(>100次)的miRNA占總讀數(shù)的27%。對(duì)不同拷貝數(shù)miRNA序列進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證發(fā)
3、現(xiàn),其結(jié)果與與測(cè)序的拷貝數(shù)一致。
(2)在所獲得的茶樹miRNA中,其中的253條屬于保守miRNA序列分別隸屬于30個(gè)保守miRNA家族,574條茶樹特異的miRNA序列;茶樹保守家族中的16個(gè)家族(miR156,miR166,miR535,miR6149等)成員數(shù)量明顯高于擬南芥等其他植物物種;生物信息學(xué)分析表明,很多茶樹miRNA調(diào)控的靶基因與生長(zhǎng)發(fā)育、次生代謝、逆境響應(yīng)及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能相關(guān)。
(3)對(duì)測(cè)序獲得
4、的miRNA經(jīng)過(guò)芯片鑒定后得出可靠的茶樹miRNA169條,其中保守miRNA為130條,茶樹特有miRNA為39條。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),有35條miRNA在葉部的表達(dá)量明顯高于根部,有60條則呈相反規(guī)律。
(4)基于miRNA芯片篩選發(fā)現(xiàn),茶樹被茶尺蠖取食后,差異表達(dá)的miRNA共有29條,其中下調(diào)表達(dá)的27條,上調(diào)表達(dá)的2條。在差異表達(dá)的miRNA中,miR159,miR319,miR396作用的靶基因具有調(diào)控防御反應(yīng)、GA、
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