核盤菌菌核圍微生物多樣性分析及拮抗細菌篩選.pdf

1、油菜在我國廣泛種植，是重要的油料作物。油菜菌核病是我國油菜生產(chǎn)上的主要病害，在長江中下游地區(qū)發(fā)病尤為嚴重，影響了油菜產(chǎn)量和品質(zhì)的提高。作為油菜菌核病的病原菌，核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum）在田間主要以菌核的形式存在，侵染期會散放子囊孢子隨氣流傳播，顯然防治油菜菌核病有很大難度。由于缺乏高抗品種，農(nóng)藥使用也有諸多問題，生物防治逐漸成為研究熱點。這其中盾殼霉因寄主?；?、防治效果好等原因受到眾多學(xué)者的青睞。由于核盤

2、菌生活史中大多數(shù)時間是以菌核這種抗逆結(jié)構(gòu)存活于土壤中，有人證明土壤中的微生物是影響菌核存活的主要因素;而盾殼霉施用后也是以孢子形式在土壤中存活，土壤中的微生物與盾殼霉之間的關(guān)系直接影響盾殼霉寄生菌核的效率。因而研究菌核周圍土壤中的微生物對于防治油菜菌核病有巨大的理論價值和實際意義。本研究主要內(nèi)容包括：
　　 ⑴定義距離菌核表皮3 mm左右的土壤為菌核圍土壤，將遠離菌核(超過5cm)的土壤定義為非菌核圍土壤。比較二者微生物種類與數(shù)

3、量的差別，確定“菌核圍效應(yīng)”的存在。分離鑒定菌核圍土壤中可培養(yǎng)的微生物，并研究其與核盤菌、盾殼霉三者間的互作，尋找能夠增強和穩(wěn)定盾殼霉防治效果的新途徑。
　　 ⑵利用T-RFLP指紋圖譜技術(shù)檢測菌核圍與非菌核圍土壤中細菌和真菌的種類。通過對所有樣品進行聚類分析及多樣性分析發(fā)現(xiàn)，第13號樣品因真菌多樣性顯著高于其他樣品(D=0.91，E=0.92)而被單獨列為1支。第10、19、22號樣品中細菌物種豐度顯著低于其他樣品(D＜0.6

4、7，E＜0.61);第3號樣品單獨1支，則是因其物種豐度較高(D=0.94，E=0.82)所致。多元線性回歸分析結(jié)果顯示，土壤樣品中真菌種類變化與取樣時間、取樣地點（菌核圍/非菌核圍）和取樣深度均無顯著關(guān)聯(lián)(P＞0.05)，細菌種類變化僅與取樣深度顯著相關(guān)(P=0.002)，回歸方程為y=11.208+3x。
　　 ⑶通過為期1年的連續(xù)采樣，發(fā)現(xiàn)各個深度菌核圍土壤含菌量與非菌核圍土壤含菌量的變化并不完全一致，但在取樣后期，無論變

5、化趨勢還是含菌量都趨于一致。各個深度菌核圍土壤含菌量的變化也不盡相同，表層土壤含菌量變化規(guī)律不明顯，5 cm與10 cm深度菌核圍土壤含菌量的變化較為一致。定義菌核圍與非菌核圍土壤中微生物數(shù)量的比值為菌核圍效應(yīng)值，計算菌核圍效應(yīng)值發(fā)現(xiàn)菌核圍土壤含菌量高于非菌核圍土壤（菌核圍效應(yīng)值大于1）。
　　 ⑷分離菌核圍土壤中可培養(yǎng)的細菌和真菌并進行鑒定，共得到7屬21種細菌和7屬12種真菌。細菌中8種屬假單胞菌，6種屬芽孢桿菌，3種為節(jié)桿

6、菌，黃桿菌屬、金黃桿菌屬、伯克氏菌屬、克雷伯氏菌屬各1種。真菌中5種屬青霉，2種屬脈胞菌，剩余5種為米根霉、黑曲霉、黃白生赤殼菌、綠色木霉和葡萄座腔菌科真菌。
　　 ⑸選取所鑒定的21種細菌的代表菌株，分析其與核盤菌以及與盾殼霉的拮抗關(guān)系。通過PDA平板對峙培養(yǎng)，共得到17株對核盤菌有拮抗效果的細菌，有4株拮抗效果顯著，其中a-B2、a-B9屬芽孢桿菌，B4屬假單胞菌，B11屬節(jié)桿菌。共得到15株對盾殼霉菌絲生長有抑制效果的細菌