雞MTNR1B和MTNR1C基因5＇調(diào)控區(qū)的多態(tài)性及其與產(chǎn)蛋性狀的關(guān)聯(lián)分析研究.pdf

1、褪黑激素(Melatonin，Mel)是主要由松果體和視網(wǎng)膜分泌的具有多種生物活性的激素，廣泛分布于多個組織中。它的分泌主要受光照時間和光照周期的影響，它與褪黑激素受體結(jié)合通過下丘腦—垂體—性腺軸從各個水平調(diào)節(jié)動物晝夜節(jié)律和繁殖功能。本研究旨在從分子水平研究雞MTNR1B和MTNR1C基因5'調(diào)控區(qū)的多態(tài)性以及不同時期卵巢中的表達(dá)差異，并驗證MTNR1B基因不同單倍型啟動活性的差異。
　　本實驗以壽光雞、文昌雞為研究材料，對雞MT

2、NR1B和MTNR1C基因5'調(diào)控區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，用單克隆測序得到MTNR1C基因外顯子1后的gap序列以及MTNR1B和MTNR1C基因可能的SNPs位點，采用直接測序的方法檢測每只壽光雞的SNPs，并將其與產(chǎn)蛋性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，對產(chǎn)蛋性狀有影響位點構(gòu)建單倍型檢測其雙熒光素酶活性，檢測MTNR1B和MTNR1C基因在不同時期卵巢中的表達(dá)情況，結(jié)果表明:
　　(1)MTNR1B基因的5'調(diào)控區(qū)存在13個SNPs位點，-836、-

3、778和-629位點完全連鎖，對26～45周齡產(chǎn)蛋數(shù)、46～50周齡產(chǎn)蛋數(shù)和總產(chǎn)蛋數(shù)有極顯著影響（P＜0.01）。群內(nèi)共有CGA、TAG兩種單倍型，單倍型CGA在前期、中期、后期產(chǎn)蛋數(shù)和50周齡總產(chǎn)蛋數(shù)上顯著高于TAG，加性效應(yīng)值分別為1.0枚、2.7枚、1.2枚和4.9枚。在中期、后期和50周齡總產(chǎn)蛋數(shù)上，兩種單倍型存在極顯著的互作，顯性效應(yīng)值分別達(dá)到了3.0枚、2.0枚和5.6枚。單倍型CGA比單倍型TAG開產(chǎn)日齡提前1.0d，有使

4、開產(chǎn)日齡提前的趨勢，但影響不顯著(P＞0.05)。
　　(2)MTNR1C基因的5'調(diào)控區(qū)存在8個SNPs位點和2處堿基插入缺失位點，-637、-597、-219、-142位點對開產(chǎn)日齡、20～25周齡產(chǎn)蛋數(shù)和總產(chǎn)蛋數(shù)有顯著影響(P＜0.05)。-637位點等位基因C比T使雞開產(chǎn)早3.5d，前期產(chǎn)蛋數(shù)多2.4枚，總產(chǎn)蛋數(shù)多4.5枚，-597位點等位基因T比C使雞開產(chǎn)早3.7d，前期產(chǎn)蛋數(shù)多2.6枚，總產(chǎn)蛋數(shù)多5.0枚，差異極顯著(

5、P＜0.01);-219位點等位基因A比G使雞開產(chǎn)提前3d，差異顯著（P＜0.05），前期產(chǎn)蛋數(shù)增加2.4枚，總產(chǎn)蛋數(shù)增加4.8枚，差異極顯著。-142位點和-219位點完全連鎖，對產(chǎn)蛋性狀的影響與-219位點是完全一致的。單倍型CTAA與TCGC相比，開產(chǎn)日齡提前3.4d，前期產(chǎn)蛋數(shù)多2.7枚，總產(chǎn)蛋數(shù)多4.1枚，差異顯著，各位點之間沒有明顯的互作效應(yīng)。-553和-549間的堿基插入缺失位點使開產(chǎn)日齡顯著提前4.1d，前期產(chǎn)蛋數(shù)顯著增

6、加2.7枚，但是后期產(chǎn)蛋數(shù)顯著減少2.3枚。
　　(3) MTNR1B和MTNR1C基因多態(tài)位點交互作用分析發(fā)現(xiàn)-836、-778、-629連鎖位點和-219、-142連鎖位點在雞的開產(chǎn)日齡上存在交互效應(yīng)（P＜0.05）。合并基因型分析發(fā)現(xiàn)，基因型CCGGAAAAAA開產(chǎn)最早為154.6d，前期、中期、后期產(chǎn)蛋數(shù)和總產(chǎn)蛋數(shù)最多。
　　(4)-836、-778、-629位點構(gòu)建三種單倍型，轉(zhuǎn)染到體外培養(yǎng)的雞卵泡膜細(xì)胞中驗證其啟

7、動活性差異。雙熒光素酶檢測結(jié)果表明，TAG啟動活性顯著高于CGA、TGG。
　　(5) MTNR1B和MTNR1C基因在不同時期卵巢中的表達(dá)情況，以140d開產(chǎn)母雞為對照，發(fā)現(xiàn)MTNR1B在42d未開產(chǎn)時表達(dá)量最高，顯著高于其他時期，MTNR1C在各個時期表達(dá)差異不顯著。140d開產(chǎn)母雞MTNR1B和MTNR1C的表達(dá)比106d未開產(chǎn)母雞下調(diào)，140d未開產(chǎn)母雞MTNR1B和MTNR1C表達(dá)也高于140d開產(chǎn)母雞，但是差異均不顯著