轉(zhuǎn)基因水稻作為肉仔雞日糧原料的安全性評(píng)價(jià).pdf

1、本論文通過5個(gè)試驗(yàn)系統(tǒng)研究了轉(zhuǎn)基因糙米對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能和肌肉組成、消化能力和健康狀況、免疫功能和腸道微生物菌群的影響，并對(duì)飼喂轉(zhuǎn)基因糙米肉仔雞肌肉和組織中抗蟲基因和抗蟲蛋白進(jìn)行了檢測(cè)，以便評(píng)價(jià)來自轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲水稻的糙米作為肉仔雞飼料原料的安全性。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因糙米未對(duì)肉仔雞產(chǎn)生明顯的不良影響，轉(zhuǎn)基因成分在肉仔雞體內(nèi)未見殘留?？梢?，試驗(yàn)期內(nèi)轉(zhuǎn)基因糙米作肉仔雞日糧原料使用是安全的。 試驗(yàn)1、轉(zhuǎn)基因糙米營(yíng)養(yǎng)成分及其對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能

2、和肌肉組成的影響本試驗(yàn)分兩個(gè)部分：糙米營(yíng)養(yǎng)成分分析和動(dòng)物試驗(yàn)。首先，以非轉(zhuǎn)基因的親本糙米作為對(duì)照，對(duì)轉(zhuǎn)基因糙米中的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分、氨基酸和礦物質(zhì)含量進(jìn)行了分析，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因糙米中的粗蛋白含量較非轉(zhuǎn)基因糙米低2.43％，17種氨基酸和某些礦物元素含量也不同，可見轉(zhuǎn)基因糙米與非轉(zhuǎn)基因糙米在營(yíng)養(yǎng)成分上沒有實(shí)質(zhì)等同性；然后，以肉仔雞為試驗(yàn)動(dòng)物探討了以轉(zhuǎn)基因糙米作為肉仔雞日糧主要能量來源對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能、屠宰性能和肌肉組成的影響。選用320只8d

3、AA肉仔雞，公母各半，分開飼養(yǎng)。按相同的方法分組，均隨機(jī)分成2個(gè)處理組，每個(gè)處理8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞，對(duì)照組飼喂非轉(zhuǎn)基因糙米日糧(Xs組)，試驗(yàn)組飼喂轉(zhuǎn)基因糙米日糧(Bt組)，分兩個(gè)階段，8～21d和22～42d。試驗(yàn)結(jié)果表明：8～21d公雞和母雞的兩個(gè)處理組耗料量、體增重和飼料效率無(wú)顯著差異(P＞0.05)；22～42d試驗(yàn)組公雞和母雞的生產(chǎn)性能均有優(yōu)于對(duì)照組(P＜0.01)；屠宰試驗(yàn)表明，試驗(yàn)組和對(duì)照組肉仔雞的屠宰率和肌肉組成

4、無(wú)顯著差異(P＞0.05)；對(duì)肉仔雞胸肌進(jìn)行近紅外光譜分析，波譜上未出現(xiàn)明顯可分辨的差異性，但對(duì)波譜進(jìn)行聚類分析后發(fā)現(xiàn)樣品在聚類圖上基本按組分成兩部分，原因有待進(jìn)一步分析。本試驗(yàn)表明，飼喂轉(zhuǎn)基因糙米對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能、屠宰性能和肌肉組成未產(chǎn)生可見的不良影響。 試驗(yàn)2、轉(zhuǎn)基因糙米對(duì)肉仔雞消化能力、血清生化指標(biāo)和器官發(fā)育的影響本試驗(yàn)旨在探討以轉(zhuǎn)基因糙米作為肉仔雞日糧的主要能量來源對(duì)肉仔雞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化利用、器官發(fā)育和某些血清生化指標(biāo)的影

5、響。試驗(yàn)將96只1dAA肉仔雞隨機(jī)分成兩個(gè)處理組，每個(gè)處理8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只雞(3只公雞，3只母雞)，對(duì)照組飼喂非轉(zhuǎn)基因糙米日糧(Xs組)，試驗(yàn)組飼喂轉(zhuǎn)基因糙米日糧(Bt組)。試驗(yàn)期42d，分兩個(gè)階段，1～21d和22～42d。18～21d和39～42d時(shí)飼料中添加0.4％的Cr2O3作為指示劑，收集糞便，測(cè)定飼料中的粗蛋白、氨基酸、鈣、磷的表觀消化率和表觀代謝能。42d時(shí)每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取1只肉仔雞，心臟采血制備血清，測(cè)定谷草轉(zhuǎn)氨酶

6、等酶活性、尿酸和甲狀腺激素含量；取血后屠宰，測(cè)定臟器和小腸的器官指數(shù)；其中肝臟、腎臟和脾臟做成顯微切片觀察病理變化，小腸各段做成切片測(cè)定絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度。試驗(yàn)結(jié)果表明：兩個(gè)階段飼料中的蛋白質(zhì)、氨基酸、鈣、磷的表觀消化率和表觀代謝能在兩個(gè)處理組之間均無(wú)顯著差異(P＞0.05)；兩個(gè)處理組42d血清的酶活、尿酸和甲狀腺激素含量，器官指數(shù)及小腸絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度無(wú)顯著差異(P＞0.05)；切片病理觀察未發(fā)現(xiàn)明顯的病理變化。這表明試驗(yàn)期內(nèi)轉(zhuǎn)基

7、因糙米對(duì)肉仔雞的健康狀況未產(chǎn)生可見的不良影響。 試驗(yàn)3、轉(zhuǎn)基因糙米對(duì)肉仔雞免疫器官發(fā)育和免疫功能的影響為研究轉(zhuǎn)基因糙米對(duì)肉仔雞免疫器官發(fā)育和免疫功能的影響，本試驗(yàn)將96只7dCobb肉仔雞隨機(jī)分成兩個(gè)處理組，對(duì)照組飼喂非轉(zhuǎn)基因糙米日糧(Xs組)，試驗(yàn)組飼喂轉(zhuǎn)基因糙米日糧(Bt組)，每組48只，設(shè)8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只(3只公雞，3只母雞)。試驗(yàn)期42d，兩個(gè)階段飼喂。分別測(cè)定了肉仔雞21d和42d胸腺、脾臟和法氏囊的器官指數(shù)，2

8、1d和42d血清中溶菌酶含量、新城疫抗體滴度，42d血清中球蛋白含量及外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。試驗(yàn)結(jié)果顯示：飼喂轉(zhuǎn)基因糙米日糧肉仔雞21d和42d免疫器官指數(shù)和飼喂非轉(zhuǎn)基因糙米日糧肉仔雞無(wú)顯著差異(P＞0.05)，兩組肉仔雞21d和42d血清中溶菌酶含量、新城疫抗體滴度未見顯著差異(P＞0.05)，42d血清中球蛋白含量以及外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率無(wú)顯著差異(P＞0.05)。研究結(jié)果表明，在試驗(yàn)期內(nèi)飼喂轉(zhuǎn)基因糙米未對(duì)肉仔雞免疫器官發(fā)育和免

9、疫功能產(chǎn)生明顯的不良影響。 試驗(yàn)4、轉(zhuǎn)基因糙米對(duì)肉仔雞腸道微生物區(qū)系的影響動(dòng)物腸道內(nèi)棲息著復(fù)雜多樣的微生物區(qū)系，該區(qū)系對(duì)宿主的生長(zhǎng)和健康具有重要意義。為研究轉(zhuǎn)基因糙米對(duì)肉仔雞腸道微生物區(qū)系的影響，試驗(yàn)將96只1d肉仔雞隨機(jī)分成兩個(gè)處理組，每個(gè)處理組48只，分成8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只(3只公雞，3只母雞)，對(duì)照組飼喂非轉(zhuǎn)基因糙米日糧(Xs組)，試驗(yàn)組飼喂轉(zhuǎn)基因糙米日糧(Bt組)。采用傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)和PCR-DGGE兩種方法，對(duì)腸

10、道內(nèi)的幾種微生物的數(shù)量和優(yōu)勢(shì)菌的多樣性進(jìn)行了研究。微生物培養(yǎng)結(jié)果表明，試驗(yàn)組肉仔雞回腸微生物數(shù)量高于對(duì)照組，其中需氧菌和乳酸桿菌數(shù)量達(dá)到差異顯著水平(P＜0.05)，而盲腸微生物數(shù)量無(wú)顯著差異(P＞0.05)；PCR-DGGE分析結(jié)果表明，飼喂轉(zhuǎn)基因糙米日糧對(duì)肉仔雞回腸和盲腸中微生物種群數(shù)量上未產(chǎn)生明顯影響(P＞0.05)，各個(gè)肉仔雞腸道中微生物種群類型既具有一定的相似性，又存在一定的差異性，但未出現(xiàn)特別異常的現(xiàn)象。試驗(yàn)結(jié)果表明，飼喂轉(zhuǎn)

11、基因糙米日糧在試驗(yàn)期內(nèi)對(duì)肉仔雞腸道微生物區(qū)系未產(chǎn)生明顯的不良影響。 試驗(yàn)5、轉(zhuǎn)基因糙米中外源基因和外源蛋白質(zhì)在肉仔雞體內(nèi)殘留的檢測(cè)隨著轉(zhuǎn)基因植物在飼料中的應(yīng)用，人們對(duì)轉(zhuǎn)基因植物中重組DNA及其表達(dá)的目的蛋白質(zhì)是否會(huì)轉(zhuǎn)移到動(dòng)物產(chǎn)品中越來越關(guān)注。本試驗(yàn)以轉(zhuǎn)cry1Ab基因的抗蟲水稻的糙米配成日糧飼喂肉仔雞，42d時(shí)隨機(jī)抽取8只，無(wú)菌條件下心臟取血，以肝素鈉抗凝；屠宰，無(wú)菌條件下取肉仔雞的肝臟、腎臟、脾臟、小腸各段、胸肌和腿肌。采用一

12、對(duì)cry1Ab基因特異的引物，以轉(zhuǎn)基因糙米中的cry1Ab基因的559bp片段為PCR擴(kuò)增體系和擴(kuò)增條件的陽(yáng)性對(duì)照，以肉仔雞內(nèi)源卵白蛋白基因396bp片段為DNA提取效果陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)血液、器官和肌肉DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)是否有cry1Ab基因559bp片段殘留或轉(zhuǎn)移，結(jié)果表明未擴(kuò)增出該基因的特異性片段；以轉(zhuǎn)基因糙米、轉(zhuǎn)基因糙米配制的肉仔雞日糧為陽(yáng)性對(duì)照，采用ELISA法檢測(cè)肉仔雞肝臟、腎臟、脾臟、小腸、胸肌和腿肌是否有由cry1Ab

13、基因表達(dá)的抗蟲蛋白的殘留或轉(zhuǎn)移，結(jié)果未檢測(cè)出Cry1Ab蛋白。這表明轉(zhuǎn)基因糙米中的重組DNA及其表達(dá)的目的蛋白質(zhì)未向肉仔雞體內(nèi)轉(zhuǎn)移和累積。 總之，通過本系列研究發(fā)現(xiàn)以轉(zhuǎn)基因糙米作為肉仔雞飼料原料配制日糧，飼喂肉仔雞后未產(chǎn)生不安全作用，且未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因成分在肉仔雞體內(nèi)會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)移和殘留。因?yàn)槿庾须u生長(zhǎng)速度快，試驗(yàn)周期短，因此在短期內(nèi)是安全的，但是轉(zhuǎn)基因糙米作為飼料原料的長(zhǎng)期安全性仍需進(jìn)一步研究。本研究不但為轉(zhuǎn)基因植物作為飼料原料的安全