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文檔簡介
1、家蠶是一種重要的生物反應(yīng)器,其一生經(jīng)歷四種不同的形態(tài)變化。在家蠶的形態(tài)變化過程中,血淋巴作為各個(gè)器官的外環(huán)境,對家蠶的形態(tài)變化有重大作用。血淋巴中的蛋白質(zhì)表達(dá)繁多,涉及貯藏、免疫、營養(yǎng)、傳遞等功能,因此研究研究血淋巴蛋白具有重要意義,而在家蠶血淋巴中,少量性質(zhì)特異的堿性蛋白質(zhì)可能具有特殊作用。
實(shí)驗(yàn)采用離子色譜聯(lián)合線性離子阱四級桿(LTQ)質(zhì)譜分析的組合來分離分析家蠶血淋巴蛋白組成。取p50家蠶5齡3天血淋巴,在pH7.5的條
2、件下,先后經(jīng)過陰離子交換柱和陽離子交換柱進(jìn)行蛋白分離,最后進(jìn)行質(zhì)譜分析。SDS-PAGE電泳顯示主要的蛋白組份是80kDa蛋白和45kDa蛋白以及超過116kDa的蛋白。質(zhì)譜鑒定出233種蛋白,其中有73種能夠確定蛋白名稱,在這些蛋白中有55種蛋白已有報(bào)道,另外18種蛋白未報(bào)道過,其中包括9種代謝相關(guān)蛋白:死亡相關(guān)蛋白、泛素結(jié)合酶E2異構(gòu)體2、胞嘧啶甲基轉(zhuǎn)移酶、核切除修復(fù)蛋白rad32、真核翻譯起始因子3亞基E、真核翻譯起始因子3亞基C
3、以及3種細(xì)胞色素蛋白 P450;3種酶抑制劑以及酶相關(guān)蛋白:胰凝乳蛋白酶抑制劑SCI-II、S相激酶相關(guān)蛋白、CP8;2種信號傳遞相關(guān)蛋白:嗅覺受體9、觸角特異蛋白3c;1種細(xì)胞組成蛋白:Actin-4;1種熱休克蛋白:熱休克蛋白90相關(guān)蛋白TRAP1;2種其它蛋白:Bm122、Kiser。在233種蛋白中有160種蛋白不能確定蛋白名稱,其中有123種蛋白沒有報(bào)道過。
為了研究一些蛋白基因在家蠶中的表達(dá)情況,從未報(bào)道的18種蛋
4、白質(zhì)中,選取5種蛋白,運(yùn)用熒光定量PCR在p50家蠶和秋豐家蠶各組織中檢測這些蛋白基因的表達(dá)譜,結(jié)果顯示,Actin4在脂肪體、中腸、后部絲腺以及馬氏管的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他基因,而且在品系之間沒有較大的差別;Kiser只在秋豐中腸和p50后部絲腺中有較高相對表達(dá)量,在其他組織中表達(dá)很少;S相激酶相關(guān)蛋白同樣在秋豐中腸和p50后部絲腺中表達(dá)較高,在其他組織中表達(dá)較少,在p50脂肪體,p50馬氏管,秋豐馬氏管中相對表達(dá)量很低。泛素結(jié)合酶 E
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