家蠶幼蟲血淋巴堿性蛋白的分離與鑒定.pdf

1、家蠶是一種重要的生物反應(yīng)器，其一生經(jīng)歷四種不同的形態(tài)變化。在家蠶的形態(tài)變化過程中，血淋巴作為各個(gè)器官的外環(huán)境，對家蠶的形態(tài)變化有重大作用。血淋巴中的蛋白質(zhì)表達(dá)繁多，涉及貯藏、免疫、營養(yǎng)、傳遞等功能，因此研究研究血淋巴蛋白具有重要意義，而在家蠶血淋巴中，少量性質(zhì)特異的堿性蛋白質(zhì)可能具有特殊作用。
　　實(shí)驗(yàn)采用離子色譜聯(lián)合線性離子阱四級桿（LTQ）質(zhì)譜分析的組合來分離分析家蠶血淋巴蛋白組成。取p50家蠶5齡3天血淋巴，在pH7.5的條

2、件下，先后經(jīng)過陰離子交換柱和陽離子交換柱進(jìn)行蛋白分離，最后進(jìn)行質(zhì)譜分析。SDS-PAGE電泳顯示主要的蛋白組份是80kDa蛋白和45kDa蛋白以及超過116kDa的蛋白。質(zhì)譜鑒定出233種蛋白，其中有73種能夠確定蛋白名稱，在這些蛋白中有55種蛋白已有報(bào)道，另外18種蛋白未報(bào)道過，其中包括9種代謝相關(guān)蛋白：死亡相關(guān)蛋白、泛素結(jié)合酶E2異構(gòu)體2、胞嘧啶甲基轉(zhuǎn)移酶、核切除修復(fù)蛋白rad32、真核翻譯起始因子3亞基E、真核翻譯起始因子3亞基C

3、以及3種細(xì)胞色素蛋白 P450；3種酶抑制劑以及酶相關(guān)蛋白：胰凝乳蛋白酶抑制劑SCI-II、S相激酶相關(guān)蛋白、CP8；2種信號傳遞相關(guān)蛋白：嗅覺受體9、觸角特異蛋白3c；1種細(xì)胞組成蛋白：Actin-4；1種熱休克蛋白：熱休克蛋白90相關(guān)蛋白TRAP1；2種其它蛋白：Bm122、Kiser。在233種蛋白中有160種蛋白不能確定蛋白名稱，其中有123種蛋白沒有報(bào)道過。
　　為了研究一些蛋白基因在家蠶中的表達(dá)情況，從未報(bào)道的18種蛋

4、白質(zhì)中，選取5種蛋白，運(yùn)用熒光定量PCR在p50家蠶和秋豐家蠶各組織中檢測這些蛋白基因的表達(dá)譜，結(jié)果顯示，Actin4在脂肪體、中腸、后部絲腺以及馬氏管的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他基因，而且在品系之間沒有較大的差別；Kiser只在秋豐中腸和p50后部絲腺中有較高相對表達(dá)量，在其他組織中表達(dá)很少；S相激酶相關(guān)蛋白同樣在秋豐中腸和p50后部絲腺中表達(dá)較高，在其他組織中表達(dá)較少，在p50脂肪體，p50馬氏管，秋豐馬氏管中相對表達(dá)量很低。泛素結(jié)合酶 E