棉酚對(duì)蛋雞肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝和抗氧化功能的影響.pdf

1、棉粕作為一種重要的蛋白原料，由于棉酚這一有毒物質(zhì)的存在限制了其在飼料生產(chǎn)上的應(yīng)用。本課題旨在研究棉酚對(duì)蛋雞肝臟脂質(zhì)代謝、氧化功能和肝臟解毒等作用的影響，探討了其影響途徑與機(jī)制，為生產(chǎn)提供一定的指導(dǎo)意義。
　　試驗(yàn)以體外培養(yǎng)原代肝細(xì)胞為試驗(yàn)對(duì)象，3日齡的海蘭褐蛋雞，取肝臟分離培養(yǎng)原代肝細(xì)胞，培養(yǎng)至48h后用于正式試驗(yàn)處理。原代培養(yǎng)的肝細(xì)胞不受體內(nèi)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的復(fù)雜影響，且能保持肝細(xì)胞的特異性功能以及對(duì)一些激素的反應(yīng)性能，因此選擇原

2、代培養(yǎng)的肝細(xì)胞是研究肝臟脂質(zhì)代謝及其他調(diào)控機(jī)制的極好模型。
　　試驗(yàn)一:原代培養(yǎng)的蛋雞肝細(xì)胞，分成4組，按0，2.5，5，10 mg/L添加棉酚的培養(yǎng)基處理24h。結(jié)果發(fā)現(xiàn):與對(duì)照組相比，棉酚處理AST、ALT活性增強(qiáng)，細(xì)胞活性降低，VLDL分泌減少，MDA濃度增加;在棉酚處理中，隨著棉酚濃度的增加，AST活性和MDA濃度顯著增加，VLDL和細(xì)胞活性顯著降低。以上結(jié)果表明:棉酚能夠損傷肝細(xì)胞，影響肝臟脂質(zhì)代謝，并且呈現(xiàn)劑量依賴性。

3、
　　試驗(yàn)二:原代培養(yǎng)的蛋雞肝細(xì)胞，分成3組，按0，2.5，5 mg/L添加棉酚的培養(yǎng)基處理。分別在處理后12、24、36、48h收集樣品，進(jìn)行樣品分析。試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):同試驗(yàn)一相似與對(duì)照組相比，棉酚處理AST、ALT活性增強(qiáng)，細(xì)胞活性降低，VLDL分泌減少，MDA濃度增加;在處理時(shí)間上，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，棉酚組AST活性變化類似呈拋物線在24-36h最顯著，細(xì)胞活性及VLDL水平在24h后都是顯著降低的，MDA的濃度在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)都是

4、顯著增加的。以上結(jié)果表明:棉酚能夠損傷肝細(xì)胞，影響肝臟脂質(zhì)代謝，并且呈現(xiàn)時(shí)間依賴性。
　　試驗(yàn)三:原代培養(yǎng)的蛋雞肝細(xì)胞，分成3組，按0，2.5，5 mg/L添加棉酚的培養(yǎng)基處理24h。結(jié)果發(fā)現(xiàn):棉酚處理顯著降低了肝細(xì)胞VLDL的分泌，對(duì)Tg含量無(wú)影響;顯著降低脂肪代謝相關(guān)基因FAS、ACC、ME、ESR、SREBP-1c、ApoB100及VLDL-(Π)mRNA的表達(dá)，對(duì)LXR、MTP mRNA的表達(dá)無(wú)影響。顯著增加了細(xì)胞內(nèi)氧化產(chǎn)

5、物H2O2、NO、MDA的濃度以及抗氧化酶CAT、SOD、GSH-Px活性，顯著降低細(xì)胞上清液中NO的濃度增加了CAT、SOD的活性，對(duì)H2O2、GSH-Px無(wú)影響;棉酚處理降低了肝細(xì)胞中Mn-SOD、Cu-Zn-SOD、GSH-Px和CAT mRNA的表達(dá)。同時(shí)棉酚處理對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因GRP78及GRP94 mRNA的表達(dá)及GRP78蛋白水平的表達(dá)無(wú)顯著影響;但顯著調(diào)高了肝臟解毒相關(guān)基因CYP1A4、CYP1A5 mRNA的表達(dá)。

6、以上結(jié)果表明:棉酚因其毒性，在誘導(dǎo)肝臟啟動(dòng)解毒體系的同時(shí)，會(huì)損傷肝細(xì)胞影響脂質(zhì)代謝，它可能是通過(guò)影響脂質(zhì)合成基因的表達(dá)降低脂質(zhì)合成，通過(guò)影響SREBP-1c通路影響脂蛋白合成;棉酚在造成肝細(xì)胞氧化應(yīng)激，同時(shí)又會(huì)增加機(jī)體的抗氧化功能。
　　試驗(yàn)四:原代培養(yǎng)的蛋雞肝細(xì)胞，分成6組，按對(duì)照組，棉酚組(5 mg/L)，雌二醇組（0.1nM），雌二醇組（1nM），棉酚+雌二醇組(5 mg/L gossypol+0.1 nM E2)，棉酚+雌

7、二醇組(5 mg/L gossypol+1nM E2)處理24h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雌二醇與棉酚聯(lián)合處理對(duì)脂質(zhì)合成代謝、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激都沒(méi)有交互作用;但H2O2濃度顯著升高，CAT、GSH-Px的活性增強(qiáng);同時(shí)，雌二醇處理降低了棉酚處理誘導(dǎo)的解毒基因CYP1A4、CYP1A5mRNA的表達(dá)。以上結(jié)果表明:棉酚與雌二醇對(duì)機(jī)體抗氧化功能存在相互促進(jìn)效應(yīng)，對(duì)機(jī)體解毒功能可能存在一定的頡頏效應(yīng)。
　　棉酚增加機(jī)體氧自由基的濃度，造成細(xì)胞的氧化損傷;通