激素誘導(dǎo)雞超數(shù)排卵、超排卵體外受精及體外培養(yǎng)的研究.pdf

1、在該研究中對(duì)白來(lái)航雞超數(shù)排卵、超排卵體外受精及體外培養(yǎng)進(jìn)行了研究,為禽類轉(zhuǎn)基因及核移植的研究奠定基礎(chǔ).1.激素誘導(dǎo)雞超數(shù)排卵的研究:產(chǎn)蛋規(guī)律母雞腹部皮下注射75IU或100IU的PMSG,連續(xù)注射3~8天,確定PMSG抑制產(chǎn)蛋的最佳劑量.結(jié)果表明:注射75IU能使33％的雞在8天內(nèi)停止產(chǎn)蛋;注射100IU能使96％的雞在8天內(nèi)停止產(chǎn)蛋,因此100IU的PMSG為適宜的注射劑量.每天注射100IU的PMSG,連續(xù)注射3~8天,直至停止產(chǎn)蛋

2、的第2天,第3天下午腹膜或靜脈內(nèi)分別注射雞垂體前葉提取物(CAPE)、丙酮干燥的雞垂體前葉提取物(ACAPE)和人絨毛膜促性腺激素(hGG)檢測(cè)誘導(dǎo)排卵的效果.結(jié)果表明:腹膜內(nèi)注射100mgCAPE,可誘導(dǎo)雞排出1.00±0.00個(gè)卵子;腹膜內(nèi)注射200mgCAPE,可誘導(dǎo)雞排出2.33±0.52個(gè)卵子;腹膜內(nèi)注射300mgCAPE,可誘導(dǎo)雞排出2.20±0.45個(gè)卵子,因此腹膜內(nèi)注射200mgCAPE為較適宜的劑量.腹膜內(nèi)注射10mg

3、ACAPE,可誘導(dǎo)雞排出2.00±0.00個(gè)卵子;腹膜內(nèi)注射15mgACAPE,可誘導(dǎo)雞排出2.86±0.69個(gè)卵子;腹膜內(nèi)注射20mg的ACAPE,可誘導(dǎo)排出3.00±1.22個(gè)卵子,因此腹膜內(nèi)注射15mgACAPE為適宜的劑量.靜脈內(nèi)注射0.1、0.5、和5mg的ACAPE都沒(méi)有卵子排出;靜脈內(nèi)注射1mgACAPE時(shí),排出1.33±0.57個(gè)卵子;注射2mgACAPE時(shí),排出2.67±0.57個(gè)卵子.靜脈內(nèi)注射500IU的hCG,排

4、出0.33±0.57個(gè)卵子;靜脈內(nèi)注射750IU的hCG,排出0.33±0.57個(gè)卵子;腹膜內(nèi)注射750IU及100IUhCG時(shí)沒(méi)有卵子排出.注射CAPE、ACAPE及hCG后7.5h,卵子排出.2.雞體外受精過(guò)程的環(huán)境掃描電鏡(ESEM)觀察:體外受精后5分鐘及10分鐘分別固定卵子,在ESEM下觀察.體外受精后5分鐘,精子位于卵黃膜的表面.精子的頭部彎曲,頂體尚未進(jìn)入卵子;體外受精后15分鐘,可觀察到多個(gè)精子同時(shí)穿入卵子的現(xiàn)象.穿入卵

5、黃膜的精子處于不同時(shí)期,有的精子的大部分已進(jìn)入卵子,只有一小段尾部還可見(jiàn).因此15分鐘為適宜的精卵體外孵育時(shí)間.3.雞超排卵體外受精及體外培養(yǎng)的研究:200倍稀釋的精液滴加在超排卵的胚盤(pán)上,在5％CO<,2>,41℃條件下,孵育15分鐘.5％CO<,2>,41℃條件下,在含有20％液體清蛋白的DME-F12培養(yǎng)基中培養(yǎng),可發(fā)育到32細(xì)胞期;在含20％液體清蛋白的M199培養(yǎng)基中可發(fā)育到8細(xì)胞期;在含28％DME-F12的液體清蛋白中可發(fā)

6、育到囊胚期;在pH為7.4的100％濃蛋白中培養(yǎng)24h發(fā)育到囊胚期,轉(zhuǎn)移到代用蛋殼中,繼續(xù)發(fā)育至原條期;在pH為7.4的100％清蛋白中沒(méi)有發(fā)育.4.PMSG對(duì)雞卵子受精及發(fā)育能力影響的研究:超排卵和自然排出的卵子體外受精后在含20％清蛋白的DME-F12中培養(yǎng)24h;產(chǎn)蛋規(guī)律的母雞每天皮下注射PMSG,連續(xù)注射3~8天,同時(shí)對(duì)其進(jìn)行人工授精,收集種蛋孵化.結(jié)果表明:超排卵具有正常的體外受精和體外發(fā)育能力,注射PMSG雞所產(chǎn)種蛋能孵化出