辣椒再生體系的建立及其遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文辣椒再生體系的建立及其遺傳轉(zhuǎn)化的研究姓名：楊梁申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：蔬菜學(xué)指導(dǎo)教師：樊治成;崔德才2002.6.12 楊梁：辣椒再生體系的建立及其遺傳轉(zhuǎn)化的研究辣椒再生體系的建立及其遺傳轉(zhuǎn)化的研究( 摘要)本文系統(tǒng)研究了影響辣椒組織培養(yǎng)的諸因素，建立了辣椒子葉的高頻再生系統(tǒng)。以辣椒子葉為材料，通過與根癌農(nóng)桿菌進(jìn)行葉盤共培養(yǎng)建立了辣椒的遺傳轉(zhuǎn)化體系，并將反義磷脂酶D y 基因轉(zhuǎn)入辣椒?！? 、辣椒再生體系的建立：

2、L ( 1 ) 芽的誘導(dǎo)根據(jù)前人的研究，我們以子葉為外植體，采用M S 基本培養(yǎng)基，誘導(dǎo)辣椒芽分化。研究6 - B A ／I A A 配比和G A 3 、A g N 0 3 、苗齡、光暗處理、培養(yǎng)基p H 、蔗糖濃度、葉片接種密度以及不同有機(jī)類型等因素對芽分化的影響。并對辣椒子葉培養(yǎng)中出現(xiàn)的褐化問題進(jìn)行了探討。結(jié)果表明，較高的6 - B A ／I A A 配比有利于芽的分化。6 - B A ／I A A 配比大于等于1 0 并且6 -

3、B A 濃度相對較高時，均可得到高于5 0 ％的出芽率。6 - B A 濃度對辣椒芽的分化影響很大。低濃度( 3 r r l g ／L 以下) 的6 - B A 難以抑制根的分化。對辣椒的芽分化而言，加入一定量的I A A 可促進(jìn)芽的分化。在M S + 6 ．B A5 ．5 m g ／L + I A A 0 ．5 m g , ' L 的培養(yǎng)基上，辣椒子葉芽分化率最高，達(dá)8 0 ％，由此確定該培養(yǎng)基為誘導(dǎo)芽分化的最適培養(yǎng)基。G A

4、 ，在芽分化中的作用較復(fù)雜。一方面，G A ，可縮短出芽的時間，使出芽時問提前3 - 5 天，而且分化芽節(jié)問有明顯的伸長。另一方面，G A 3 降低了芽分化率( 降至6 0 ％左右) ，誘導(dǎo)出的不定芽長勢較差，生長困難。實驗發(fā)現(xiàn)，加入硝酸銀可縮短芽誘導(dǎo)所需時間1 ．2 天，芽最初生長加快。低濃度硝酸銀對芽的誘導(dǎo)影響不大，較高濃度的硝酸銀對芽的誘導(dǎo)不利。本實驗中無需加入G A 3 和硝酸銀。實驗結(jié)果表明苗齡介于1 1 - - 1 5 天，

5、葉片接種密度為1 0 片，皿，蔗糖濃度為3 0 9 ／L ，出芽率最高，達(dá)8 0 ％以上。芽分化對D H 有較大的適應(yīng)范圍，一定范圍內(nèi)p H 的變化不會影響芽的再生。P H 值為5 ．8 對辣椒子葉芽的分化是適宜的。暗處理不利于辣椒的再生。較弱光照對辣椒芽分化有利．較強的光照對芽再生有一定程度的阻礙。光強以1 0 0 0 1 u x 為宜。組織培養(yǎng)中常發(fā)生褐化現(xiàn)象，添加抗氧化劑還是采用改進(jìn)措施，都能一定程度上減輕褐化現(xiàn)象，但不能從根本上

6、解決褐化問題。在辣椒的組織培養(yǎng)中，選用酚類氧化物含量較低的品種十分關(guān)鍵。采用M s 有機(jī)、B 5 有機(jī)和Z H 有機(jī)均可獲得較高的芽分化率和芽分化數(shù)。( 2 ) 芽的伸長辣椒再生中，最大的困難在于芽的伸長。激素組合( 6 ．B A 5 m g ／L ，I A A 0 ．4 m 嘰) ，芽生長旺盛的百分率懸高。效果較理想．可基本滿足芽正常生長對激素的需求。添加G A 3 ，濃度為4 m g ／L ，芽伸長效果最好。晟終確定( 6 - B

7、A 5 ．0 m g , ' L ，I A A 0 ．4 m g ／L ，G A 3 4 m ∥L ) 為芽伸長的最適激素組合。Z H 有機(jī)是在M S 有機(jī)基礎(chǔ)上，煙酸用量加倍，并添加葉酸和生物素而成。辣椒的芽仲長階段，Z H 有機(jī)上芽伸長率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高丁M S 有機(jī)，說明Z H 有機(jī)的確可促進(jìn)了芽的正常伸長。最終確定最適的芽伸歐培養(yǎng)基為M s 鹽+ Z H 有機(jī)+ 6 ．B A 5 ．0 m g ／L + I A A0 ．4 m ∥