檢測(cè)鵝細(xì)小病毒（GPV）強(qiáng)毒PCR方法的建立及人工感染GPV強(qiáng)毒在雛鵝體內(nèi)分布規(guī)律的研究.pdf

1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文檢測(cè)鵝細(xì)小病毒（GPV）強(qiáng)毒PCR方法的建立及人工感染GPV強(qiáng)毒在雛鵝體內(nèi)分布規(guī)律的研究姓名：黃誠(chéng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：程安春汪銘書(shū)20030501摘要根據(jù)國(guó)際基因庫(kù)(GeneBank)1995年發(fā)布的鵝細(xì)小病毒(GPV)B株的全基因組序列，針對(duì)GPV的保守基因片段VP3設(shè)計(jì)一對(duì)引物，建立了一種用于檢測(cè)GPV的特異的PCR方法，該法能夠特異地?cái)U(kuò)增出預(yù)期大小約441bp片段。特異性實(shí)驗(yàn)證明，該

2、法對(duì)鴨瘟病毒、鵝致病性大腸桿菌08和01、雛鵝新型病毒性腸炎病毒(NGVEV)呈陰性反應(yīng)，僅能從鵝細(xì)小病毒(GPV)和番鴨細(xì)小病毒(MDPV)中擴(kuò)增出特異性片段。靈敏性實(shí)驗(yàn)證明該方法的檢測(cè)GPV核酸的靈敏度達(dá)到047pg。運(yùn)用所建立的特異的PCR方法，對(duì)人工感染鵝細(xì)小病毒后病毒在雛鵝體內(nèi)的分布規(guī)律進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：病毒在雛鵝體內(nèi)的分布規(guī)律因病毒感染的途徑的不同而存在差異。經(jīng)口感染組在感染后4小時(shí)不能從組織中檢出病毒DNA，感染后8小

3、時(shí)能從心臟、肝臟中檢出病毒DNA、感染后24小時(shí)能從胸腺、胰腺、十二指腸、小腸、法氏囊、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、血液中檢出病毒DNA，感染后48小時(shí)后能夠從直腸、骨髓、肺臟中檢出病毒DNA，感染后72小時(shí)能從小腦、延髓、盲腸、肌肉、糞便中檢出病毒DNA，感染后312小時(shí)后仍能從十二指腸、空腸、直腸、心臟、肝臟、腎臟、肌肉、糞便中檢出病毒DNA。經(jīng)皮下注射感染組在感染后4小時(shí)不能從組織中檢出病毒DNA，感染后8小時(shí)能夠從心臟，肝臟中檢測(cè)出

4、病毒DNA，感染后24小時(shí)能夠從延髓、胸腺、胰腺、十二指腸、空腸、盲腸、法氏囊、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、血液、小腦、直腸、肌肉、糞便中檢出病毒DNA，感染后48小時(shí)后能從骨髓中檢測(cè)出病毒DNA，在感染后312小時(shí)后仍能從十二指腸、空腸、盲腸、心臟、肝臟、腎臟，糞便中檢出病毒DNA。經(jīng)滴鼻感染組在感染后4小時(shí)不能從組織中檢出病毒DNA，感染后8小時(shí)后能夠從心臟、肝臟中檢出病毒DNA，感染后24小時(shí)能夠從胸腺、十二指腸、直腸、空腸、肺

5、臟、心臟、肝臟中檢測(cè)出病毒DNA，感染后48小時(shí)能夠從小腦、延髓、胰、盲腸、法氏囊、脾臟、肌肉、骨髓、糞便、血液中檢出病毒DNA，在感染后312小時(shí)后仍能從胸腺、十二指腸、空腸、盲腸、直腸、心臟、肝臟、腎臟、糞便中檢出病毒DNA。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的鵝在感染后83天均不能從體內(nèi)檢出病毒DNA。經(jīng)皮下感染后病毒在雛鵝體內(nèi)的分布速度較經(jīng)口服和滴鼻感染后病毒在雛鵝體內(nèi)分布速度快。各種受檢組織中心臟和肝臟的檢出率最高。經(jīng)不同途徑感染后，病毒均在感染后7