WSSV感染中國對蝦血細(xì)胞及其在血細(xì)胞膜上結(jié)合蛋白的研究.pdf

1、選用2×L-15作為基本培養(yǎng)基,添加20﹪的FBS及其他成份,NaCl調(diào)節(jié)滲透壓,pH7.2～7.4,29℃恒溫,原代培養(yǎng)中國對蝦血細(xì)胞,倒置相差顯微鏡觀察可活20d左右.用白斑綜合癥病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)梯度稀釋液感染培養(yǎng)血細(xì)胞,相差顯微鏡觀察細(xì)胞死亡狀況.離心收集WSSV感染的完整的血細(xì)胞,細(xì)胞免疫組化法(immunocytochemistry, ICC)檢測被感染血細(xì)胞內(nèi)的WSSV,結(jié)

2、果陽性明顯.酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)檢測表明,WSSV在中國對蝦血細(xì)胞內(nèi)隨時間和WSSV的濃度的不同而增殖的幅度較小.以冰浴研磨,冷凍離心的方法提取中國對蝦的血細(xì)胞膜,電鏡下可見膜兩邊向中間卷曲的形狀,將中國對蝦的全血細(xì)胞與其血細(xì)胞膜做聚丙烯酰胺凝膠電泳(sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)

3、,比較二者蛋白質(zhì)的差別.用病毒結(jié)合膜蛋白印跡技術(shù)(virus overlay-protein binding assay, VOPBA)檢測中國對蝦血細(xì)胞膜上的WSSV結(jié)合蛋白,結(jié)果呈現(xiàn)三條陽性蛋白帶,分子量分別為83.0、74.0、69.9KDa,對照全血細(xì)胞與血細(xì)胞膜的凝膠電泳結(jié)果可知,血細(xì)胞膜上有兩條結(jié)合蛋白,分子量分別為74.0、69.9KDa.這三條結(jié)合蛋白的特征和作用還需做進(jìn)一步研究.另外,還做了中國對蝦、日本對蝦、南美白對