29857.魚類適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的早期發(fā)生以及ikaros基因的克隆和表達

1、中國海洋大學(xué)博士學(xué)位論文魚類適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的早期發(fā)生以及Ikaros基因的克隆和表達姓名：李風鈴申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：海洋生物學(xué)指導(dǎo)教師：張士璀20090601中國海洋大學(xué)博士學(xué)位論文能力，其發(fā)育成熟的時間可能會稍早于之前認為的46周。在本論文的第二部分，我們從重要的經(jīng)濟魚類半滑舌鰨中分離出了一個關(guān)鍵的血細胞分化相關(guān)因子Ikaros基因。Ikaros的eDNA全長為1685bp，其開放閱讀框為1290bp，編碼430個氨基酸。5’非編

2、碼區(qū)為24bp，3’非編碼區(qū)為371bp。用Ikaros基因的氨基酸序列與其他物種的Ikaros以及家族其他成員包括Helios、Aiolos和Eos的氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，發(fā)現(xiàn)半滑舌鰨中的Ikaros與包括青鯔、螄魚、虹鱒以及斑馬魚在內(nèi)的魚類展示了較近的親緣關(guān)系，在進化樹中聚為一支。進一步用部分物種lkaros的保守區(qū)進行同源性比對，發(fā)現(xiàn)同源性較高的區(qū)域主要集中在N、C末端的鋅指結(jié)構(gòu)域。這同哺乳動物中的研究結(jié)果是一致的，即N末端和

3、C末端的鋅指結(jié)構(gòu)在進化過程中變化較小，保守性較強。我們又利用DNAstar中的CLUSTALW方法對Ikaros的氨基酸進行了結(jié)構(gòu)上的相似度分析，結(jié)果與聚類分析一致，與青鯔、鯽魚、虹鱒以及斑馬魚相似度較高，分別達80O％、767％、667％以及573％。因為在其他物種早已證明Ikaros是調(diào)控免疫系統(tǒng)發(fā)生和發(fā)育的轉(zhuǎn)錄因子，為了驗證它是否與免疫相關(guān)，我們首先利用實時定量RTPCR技術(shù)檢測了其在不同組織的表達情況。結(jié)果顯示，Ikaros基因

4、在半滑舌鰨中的胸腺、肝臟和脾中表達量較高，在腎臟、精巢和心臟中也有一定量的表達，而在腸、皮膚以及鰓中幾乎檢測不到或者表達量很低。這與美西螈、晶吻鰩和七鰓鰻中的檢測結(jié)果基本一致，這表明了半滑舌鰨中的Ikaros基因在主要的免疫器官中均有表達，在表達模式上也具有一定的保守性。這暗示我們，半滑舌鰨中的Ikaros可能與其他物種的Ikaros一樣，在免疫防御上具有一定的功能。我們從半滑舌鰨的頭腎中分離出巨噬細胞，進行培養(yǎng)，然后用LPS或LTA對