水稻再生體系建立與反義蠟質(zhì)基因?qū)爰皺z測的研究.pdf

1、萊陽農(nóng)學(xué)院碩士學(xué)位論文水稻再生體系建立與反義蠟質(zhì)基因?qū)爰皺z測的研究姓名：賀紅申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：作物耕作學(xué)與栽培學(xué)指導(dǎo)教師：石巖李曉方20040501培養(yǎng)基為：MS05mg／LNAA15mg／LKT2mg／L6BA10panol／LCuS04，分化率分別達(dá)87％和40％。AgN03單因子實(shí)驗(yàn)表明：Ag不但能促進(jìn)愈傷組織的分化，而且有助于減少玻璃苗的產(chǎn)生，但是分化苗中畸形苗較多。Ag濃度為59mol／L時，愈傷組織分化率最高，粵香占

2、為30％，軟香ih為375％。在根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)秈稻基因轉(zhuǎn)化中，農(nóng)桿菌菌株為EHAl05，表達(dá)載體為p13WG。不同基因型愈傷組織有不同適宜濃度的超霉素選擇壓，本研究中的粵香占和軟香占對超霉素比較敏感，適宜的選擇壓分別為10mg／L、15mg／L；經(jīng)穩(wěn)定表達(dá)率和GUS瞬時表達(dá)率測定表明：EHAl05菌株的OD600為O5左右時，侵染愈傷組織的能力最強(qiáng)，通過篩選可獲得較高的抗性愈傷數(shù)，粵香占為178％，軟香占為126％，且共培養(yǎng)3天比較適宜

3、；愈傷組織在活化的農(nóng)桿菌中浸泡10rain左右最適宜，抗性愈傷組織獲得率最高，粵香占為178％和軟香占163％；在共培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基中添加1001LLmol／L的乙酰丁香酮(AS)抗性愈傷數(shù)獲得率最高，粵香占為175％，軟香占為111％；在重懸液侵染愈傷組織之前2小時添加乙酰丁香酮(AS)，抗性愈傷組織的穩(wěn)定表達(dá)率最高，粵香占為223％和軟香占為132％；共培養(yǎng)基中添加209／L的葡萄糖有利于提高愈傷組織的GUS瞬時表達(dá)率，粵香占和軟