穗莖注射法導(dǎo)入反義PLD-,γ-基因小麥的分子檢測(cè)及性狀鑒定.pdf

1、本研究利用改良的穗莖注射法將反義PLDγ基因?qū)肫胀ㄐ←溙m考906，在卡那霉素篩選的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了特異PCR擴(kuò)增、PCR-Southern雜交檢測(cè)，結(jié)果證明反義PLDγ基因整合到了受體的染色體中；同時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)基因株系與受體在蛋白質(zhì)水平上的表達(dá)、耐鹽性、白粉病抗性、相關(guān)品質(zhì)性狀及主要農(nóng)藝性狀上的差異進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下：1.首次獲得了轉(zhuǎn)反義PLDγ基因小麥植株。對(duì)卡那霉素篩選的抗性苗，經(jīng)特異PCR擴(kuò)增，3個(gè)材料擴(kuò)增出與陽(yáng)性質(zhì)粒大小相同的4

2、00bp的目的片段，PCR-Southern雜交結(jié)果與擴(kuò)增結(jié)果一致，說(shuō)明該基因整合到小麥的基因組中，獲得了轉(zhuǎn)基因小麥植株。2.醇溶蛋白電泳結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因株系與受體相比存在著顯著的差異，主要體現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因后代中出現(xiàn)了新帶或者缺少了受體的部分譜帶及表達(dá)量的差異。3.麥谷蛋白電泳結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因株系的HMW-GS亞基組成發(fā)生了變化。4.轉(zhuǎn)基因株系的抗性提高。耐鹽水培鑒定和0.5﹪的混合鹽土培鑒定結(jié)果及差異性檢驗(yàn)表明，轉(zhuǎn)基因株系的耐鹽性均達(dá)到1