盾殼霉產(chǎn)生的幾丁質(zhì)酶及其作用研究.pdf

1、盾殼霉(Coniothyrium minitans)是核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)的重寄考真菌和重要生防菌.為了明確盾殼霉寄生核盤菌和抑制核盤菌子囊孢子侵染的機(jī)制從而更好地利用盾殼霉資源,該研究開(kāi)展了對(duì)盾殼霉幾丁質(zhì)酶的產(chǎn)生條件、基本性質(zhì)、分離純化以及與核盤菌關(guān)系等方面的研究.在比較馬鈴薯培養(yǎng)液(mPDB)和一種合成營(yíng)養(yǎng)液(SMCS)對(duì)盾殼霉幾丁質(zhì)酶產(chǎn)量的基礎(chǔ)上,摸索出了一個(gè)盾殼霉產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶的最佳培養(yǎng)基.其

2、配方是:去皮馬鈴薯200g,葡萄糖0.5﹪(w/v),硝酸鉀0.1﹪(w/v),水1000mL,pH為6.5.在這種培養(yǎng)液中接種盾殼霉分生孢子(10<'8>個(gè)孢子/50mL培養(yǎng)液),并在20℃下振蕩(200r/min)培養(yǎng)15d可獲得較高的幾丁質(zhì)酶產(chǎn)量.從多種碳源對(duì)盾殼霉幾丁質(zhì)酶產(chǎn)量的影響來(lái)看,用該酶的反應(yīng)產(chǎn)物(N-乙酰氨基葡萄糖)較其反應(yīng)底物(幾丁質(zhì))能更有效地誘導(dǎo)盾殼霉產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶.在含有草酸(100-3000μg/mL的培養(yǎng)液中,

3、盾殼霉通過(guò)生長(zhǎng)使培養(yǎng)液的pH值上升至8左右,幾丁質(zhì)酶的產(chǎn)量明顯提高.采用鹽析透析、陰離子交換層析和凝膠過(guò)濾層析等程序?qū)Χ軞っ箮锥≠|(zhì)酶進(jìn)行了分離純化.結(jié)果表明鹽析透析后可有效沈縮盾殼霉培養(yǎng)液中的幾丁質(zhì)酶;用Tris-HCl(0.05mol/L,pH8.0)-NaCl(0.8mol/L)為洗脫液,以2mL/min流速洗脫DEAE-SepharoseFF層析柱上的混合蛋白質(zhì)可較好地分離出幾丁質(zhì)酶組分.但由于幾丁質(zhì)酶含量太低,所以采用Sepha