10504.不同尾部陽離子類脂的合成及基因轉(zhuǎn)運(yùn)性能研究

1、分類號：密級：學(xué)校代碼：10165學(xué)號：201311000900遣掌研耗大學(xué)碩士學(xué)位論文②不同尾部陽離子類脂的合成及基因轉(zhuǎn)運(yùn)性能研究作者姓名：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：石佳化學(xué)、有機(jī)化學(xué)有機(jī)合成于世鈞教授張樹彪教授2016年4月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要基因治療是一種新型治療癌癥的方法，但是缺乏安全高效的載體嚴(yán)重限制其應(yīng)用。陽離子脂質(zhì)體由于制備方法簡單、毒性低，己成為一種應(yīng)用廣泛的非病毒基因載體。為探究不同尾部陽離子類脂對基因轉(zhuǎn)

2、運(yùn)的影響，本論文在課題組已有的以C12：0和C14：0為尾部的陽離子類脂DCTA和TCTA的基礎(chǔ)上，合成了三個不同尾鏈長度及不飽和度陽離子類脂HCTA、OCTA和UCTA(季銨鹽頭部、氨基甲酸酯鍵、丙三醇骨架以及C16：0、C18：0和C18：1疏水尾部)。純化后，通過質(zhì)譜、紅外、核磁氫譜、核磁碳譜、高效液相色譜等進(jìn)行表征，確認(rèn)其結(jié)構(gòu)，純度在95％以上。通過氮?dú)獯的づc超聲分散法的方法將所合成的不同尾部陽離子類脂制備成陽離子脂質(zhì)體，利用激

3、光粒度分析儀對其粒徑大小和zeta電位進(jìn)行研究，脂質(zhì)體尺寸在149到336nlTl范圍內(nèi)，電位處于55～68mV之間。用瓊脂糖凝膠延滯實(shí)驗(yàn)探究了不同尾部陽離子脂質(zhì)體復(fù)合DNA的程度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，陽離子脂質(zhì)體能夠和DNA復(fù)合。鏈長度及不飽和度的差異，致使脂質(zhì)體結(jié)合DNA能力有所差別，DCTA、TCTA和UCTA脂質(zhì)體結(jié)合能力較強(qiáng)。當(dāng)脂質(zhì)體和DNA以不同比例復(fù)合，比例增大，其與DNA的復(fù)合程度隨之增強(qiáng)。將所制備的不同尾部陽離子脂質(zhì)體運(yùn)輸質(zhì)

4、粒DNA對宮頸癌細(xì)胞(Heh)、人喉癌細(xì)胞(Hep2)和人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞(NCIH460)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。結(jié)果表明，當(dāng)脂質(zhì)體復(fù)合DNA的比例為3／1時，陽離子脂質(zhì)體獲得了最佳的轉(zhuǎn)染效率。由于尾部結(jié)構(gòu)的不同DCTA、TCTA和UCTA顯示了比較好的轉(zhuǎn)染效率。DCTA和TCTA轉(zhuǎn)染效率接近商品試劑Lipo佬ctam血e2000，同時UCTA轉(zhuǎn)染性能優(yōu)于商品試劑DOTAP。助類脂的加入量對轉(zhuǎn)染效率存在影響，當(dāng)制備的脂質(zhì)體以陽離子類脂與DOPE的摩爾