春蘭‘宋梅’和雜交蘭組培苗的菌根化研究.pdf

1、蘭科植物多數(shù)種是著名的藥用植物和珍貴的觀賞花卉。國(guó)蘭指原產(chǎn)于我國(guó)的蘭科(Orchidaceae)蘭屬(Cymbidium)植物。蘭科植物菌根是蘭科植物與真菌形成的共生聯(lián)合體，它們?cè)谔m科植物的生命活動(dòng)中起著重要的作用。本研究旨在將菌根技術(shù)與組培技術(shù)相結(jié)合，在馴化培育階段，通過(guò)人工接菌，建立蘭花組培苗與真菌共生培養(yǎng)體系，篩選出優(yōu)良的蘭科植物共生真菌，這將為蘭花菌劑的研發(fā)及其優(yōu)良種苗高效培育提供科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　1、在盆

2、栽條件下，采用從4種野生國(guó)蘭根部分離出的5種被孢霉屬M(fèi)ortierella sp.真菌，配置成200mL/L、400mL/L和600mL/L的液體菌劑對(duì)春蘭‘宋梅’組培苗進(jìn)行接種試驗(yàn)，結(jié)果表明菌株FC5對(duì)春蘭組培苗生長(zhǎng)促進(jìn)作用更加顯著。菌株FC5處理組組培苗鮮重增長(zhǎng)率、新生葉片數(shù)、株高增長(zhǎng)量與對(duì)照組存在顯著性差異，同時(shí)FC5促進(jìn)了幼苗根長(zhǎng)度的增加，但對(duì)于根條數(shù)增多卻沒(méi)有顯著的促進(jìn)作用。
　　2、采用4種真菌，通過(guò)固體菌劑和液體菌劑

3、兩種接種方式，建立雜交蘭組培苗與真菌的共生培養(yǎng)體系。結(jié)果表明雜交蘭組培苗接種液體菌劑效果普遍優(yōu)于接種固體菌劑，F(xiàn)C9和FC5菌株對(duì)雜交蘭組培苗的生長(zhǎng)促進(jìn)作用顯著，F(xiàn)C17菌株對(duì)雜交蘭組培苗的根部生長(zhǎng)促進(jìn)效果顯著。
　　3、采用石蠟切片法，在顯微鏡下觀察菌根結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明春蘭和雜交蘭均具有菌絲、菌絲結(jié)等典型的菌根結(jié)構(gòu)，菌苗共生150d后，菌絲在根內(nèi)定殖。菌絲由根毛侵入或直接破壞根被組織進(jìn)入皮層細(xì)胞。菌絲常出現(xiàn)在細(xì)胞核附近，在靠近外皮

4、層的皮層細(xì)胞中有針狀晶體，中柱周圍皮層細(xì)胞內(nèi)分布有大量淀粉顆粒。
　　4、用CTAB法提取春蘭和雜交蘭重分離真菌的基因組DNA，PCR產(chǎn)物經(jīng)純化、連接和轉(zhuǎn)化后，送菌液測(cè)序獲得了菌株的rDNA ITS區(qū)段的序列，通過(guò)序列比對(duì)后，修正序列在NCBI中進(jìn)行BLAST比對(duì)分析,與網(wǎng)上基因庫(kù)Genbank中登錄號(hào)為FJ810149.1的Mortierella sp.dd08032序列查詢對(duì)比，序列相似度達(dá)99％以上，結(jié)合真菌形態(tài)觀察，確定重