輪狀病毒基因工程疫苗免疫效果的研究.pdf

1、　　輪狀病毒(RV)是引起全世界嬰幼兒和幼齡動(dòng)物嚴(yán)重腹瀉的最重要、最常見(jiàn)的病原。在發(fā)展中國(guó)家，每年因RV感染發(fā)生中度和嚴(yán)重腹瀉以及死亡的兒童高達(dá)1887萬(wàn)人；在發(fā)達(dá)國(guó)家，因RV感染造成的經(jīng)濟(jì)損失是一個(gè)不容忽視的問(wèn)題。據(jù)估計(jì)美國(guó)每年就此一項(xiàng)的醫(yī)藥損失高達(dá)2億6千萬(wàn)美元。鑒于RV危害嚴(yán)重且無(wú)有效的治療手段，世界衛(wèi)生組織(WHO)將RV疫苗列為最優(yōu)先發(fā)展的疫苗項(xiàng)目之一。目前正在研制的候選RV疫苗包括重組或減毒疫苗、滅活疫苗、病毒樣顆粒(VLP

2、s)疫苗、亞單位疫苗、DNA疫苗和轉(zhuǎn)基因植物疫苗等，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明這些疫苗的免疫保護(hù)效果差異較大，因此對(duì)于新型RV疫苗的研究仍在探索之中?！　組RV血清型眾多，疫苗研究實(shí)踐表明，包含中和性抗原的多價(jià)疫苗的效果要好于單價(jià)疫苗。為了探索以非復(fù)制型腺病毒為表達(dá)載體的多價(jià)RV基因工程疫苗的可行性，我們?cè)谇捌讷@得了表達(dá)我國(guó)A組RVG1型、G2型和G3型流行毒株VP7基因的非復(fù)制型重組腺病毒rvAdG1VP7、rvAdG2VP7和rvAdG3VP

3、7，并對(duì)其免疫效果進(jìn)行了研究，均獲得了良好的免疫效果。RVVP6蛋白是其主要的組特異性抗原，有較強(qiáng)的抗原性和免疫原性，可誘導(dǎo)保護(hù)性免疫。研究表明，VP6蛋白的IgA單克隆抗體對(duì)RV感染具有免疫保護(hù)作用，肌注免疫VP6DNA疫苗可產(chǎn)生較好的異源保護(hù)作用，以VP6蛋白和黏膜佐劑免疫小鼠可誘導(dǎo)產(chǎn)生對(duì)鼠RVEDIM株的完全保護(hù)作用。為了獲得更有效的RV基因工程疫苗，我們?cè)谇捌跇?gòu)建了表達(dá)我國(guó)A組RVVP6基因的非復(fù)制型重組腺病毒rvAdVP6。

4、　　本論文在上述工作的基礎(chǔ)上，對(duì)輪狀病毒重組腺病毒疫苗rvAdVP6的免疫效果進(jìn)行了研究。以Balb/c小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，對(duì)表達(dá)我國(guó)A組RVVP6基因的非復(fù)制型重組腺病毒rvAdVP6的免疫效果進(jìn)行了研究，結(jié)果表明rvAdVP6與rvAdG1VP7、rvAdG2VP7和rvAdG3VP7一樣，也獲得了較好的免疫效果；在此工作基礎(chǔ)上，對(duì)RVVP6基因的優(yōu)化改造策略方法進(jìn)行了研究，結(jié)果表明通過(guò)改良的套式PCR策略，應(yīng)用逐步拼接法成功地合成