水稻抗病相關RNA解旋酶基因OsBIRH1的功能分析及YTH蛋白基因家族的初步研究.pdf

1、浙江大學農業(yè)與生物技術學院博士學位論文水稻抗病相關RNA解旋酶基因OsBIRH1的功能分析及YTH蛋白基因家族的初步研究姓名：李大勇申請學位級別：博士專業(yè)：植物病理學指導教師：宋鳳鳴20071001OsBIRHl基因T1代擬南芥植株。Southern分析表明l～2個拷貝的OsBIRHl基因已整合到擬南芥基因組DNA中。RTPCR分析結果表明所檢測的OsBIRHI轉基因煙草T3代單拷貝純合體植株都能夠正常表達?？共⌒詼y定表明，這些轉基因植

2、株提高了對Alternaria6r甜s七耙。腸、PseudorYlonassyringaepvfomdf0DC3000的抗病性，這些轉基因揎株中尸尺一』，P兄2、PR一5PD幾，2基因都有組成型增強表達。此外，轉OsBIRHl基因植株對干旱脅迫和氧化脅迫都表現(xiàn)出一定的抗性。這些結果表明OsBIRHl編碼了一個DEAD—boxRNA解旋酶，而且在植物抗病和抗逆方面扮演著重要的角色。最近，運用生物信息學方法在蛋白數(shù)據(jù)庫中鑒定發(fā)現(xiàn)一類非常保守

3、的未知功能蛋白，并且推測這些包含保守結構域YTH的蛋白可能具有RNA結合的攝性。為了深入了鱷這些含YTH結構域蛋自的生物學功能，我們運用生物信息學方法在擬南芥和水稻基因組中分別鑒定了13和12個基因，命名為AtYTH01—13和OsYTH01～12。這些結果表明在高等植物中含有YTH結構域的蛋島組成一個相對較小的基因家族。擬南芬和水稻的YTH家族成員蛋白都包含一個非常保守的YTH結構域，但是在這個結構域外還沒有發(fā)現(xiàn)其它已知的或者保守的結

4、構域。將AtYTH05和AtYTH07的編碼區(qū)ORF克隆進原核表達載體，純化獲得重組的蛋自。凝膠阻滯試驗的結果發(fā)現(xiàn)重組的AtYTH05融合蛋白能夠在體外與單鏈RNA相結合，表明YTH蛋白具有RNA結合活性。同時，我們也用RTPCR的方法分析了擬南芥YTH家族所有成員的表達模式，結果顯示擬南芥YTH家族基函的表達都存在著組織和時空韻特異性。我們還克隆了AtYTH05和AtYTH07的啟動子，構建Promoter：：GUS融合基因并轉化擬南