sGLP-1對(duì)Ⅱ型糖尿病的治療作用及機(jī)理的研究.pdf

1、胰高血糖素樣肽（glucagon like peptide-1,GLP-1）是腸道朗格漢斯細(xì)胞（Langerhans cell）分泌的一種具有多種生物學(xué)功能的活性肽。近年來(lái)它對(duì)糖尿病，特別是Ⅱ型糖尿病的治療作用日益受到關(guān)注。本研究欲通過(guò)將人工合成GLP-1 的截短肽（sGLP-1）作用于Ⅱ型糖尿病大鼠和胰島β細(xì)胞系，從而研究其對(duì)Ⅱ型糖尿病的治療作用和機(jī)理。在實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用GK 大鼠Ⅱ型糖尿病模型，以人工重組胰高血糖素樣肽（rhGLP-1）

2、為陽(yáng)性對(duì)照品，對(duì)sGLP-1 在Ⅱ型糖尿病治療中的作用進(jìn)行了對(duì)比藥效學(xué)分析。此外，還應(yīng)用體外培養(yǎng)胰島β細(xì)胞系βTc3 細(xì)胞、細(xì)胞增殖蛋白Ki-67 和細(xì)胞凋亡蛋白Caspase-3，分別探討了sGLP-1 對(duì)胰島β細(xì)胞增殖和凋亡的影響，進(jìn)而從促進(jìn)胰島β細(xì)胞增殖和抑制胰島β細(xì)胞凋亡方面探索sGLP-1 對(duì)Ⅱ型糖尿病的治療機(jī)理。主要內(nèi)容及結(jié)果如下： （一）sGLP-1 對(duì)Ⅱ型糖尿病的治療作用 1. 正常BALB/c 小鼠按血

3、糖水平均衡的原則分組，給予不同劑量的sGLP-1 1 次，15min 后測(cè)血糖值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，給予正常小鼠不同劑量的sGLP-1 對(duì)正常小鼠血糖值影響不明顯（P>0.05）。 2. 正常小鼠腹腔注射葡萄糖后立即皮下注射sGLP-1 （35μg·kg-1）、rhGLP-1（35μg·kg-1）或優(yōu)降糖（50μg·kg-1），結(jié)果發(fā)現(xiàn)給藥組在給予葡萄糖30min、60min、120min 時(shí)的血清葡萄糖值均明顯低于皮下注射生理鹽水對(duì)照

4、組（P<0.01）；與僅空腹注射生理鹽水組小鼠血清葡萄糖值比較無(wú)明顯差異，但優(yōu)降糖組有出現(xiàn)低血糖的趨勢(shì)。 3. GKⅡ型糖尿病大鼠連續(xù)皮下注射sGLP-1 （25μg·kg-1）或rhGLP-1（25μg·kg-1），3 周后給藥組大鼠血清葡萄糖值明顯低于生理鹽水對(duì)照組（P<0.01）。 4. 連續(xù)皮下注射sGLP-1（25μg·kg-1）或rhGLP-1（25μg·kg-1）3 周后，改為間隔給藥。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，間隔1 天

5、給藥一次2 周后兩個(gè)給藥周組大鼠均仍能維持血清葡萄糖的正常水平（與生理鹽水對(duì)照組比較，P<0.01）；每周給藥（50μg·kg-1）兩次，1 個(gè)月后發(fā)現(xiàn)僅給予sGLP-1 的GKⅡ型糖尿病大鼠血清葡萄糖值能維持正常水平（與生理鹽水對(duì)照組比較，P<0.01），而給予rhGLP-1 組大鼠血清葡萄糖值明顯升高。停藥3 周后，給予sGLP-1 的GKⅡ型糖尿病大鼠血清葡萄糖值仍然能維持在接近正常水平（與生理鹽水對(duì)照組比較，P<0.01）。

6、 5. GKⅡ型糖尿病大鼠連續(xù)皮下注射sGLP-1（25μg·kg-1）或rhGLP-1（25μg·kg-1），3 周后進(jìn)行空腹糖耐量試驗(yàn)。結(jié)果表明，sGLP-1 和rhGLP-1均能夠明顯改善GKⅡ型糖尿病大鼠的糖耐量（與生理鹽水對(duì)照組比較，P<0.01）。 6. GKⅡ型糖尿病大鼠連續(xù)皮下注射sGLP-1（25μg·kg-1）、rhGLP-1（25μg·kg-1）或生理鹽水對(duì)GKⅡ型糖尿病大鼠正常胰島素水平無(wú)明顯影響（P

7、>0.05）。 7. GKⅡ型糖尿病大鼠連續(xù)皮下注射sGLP-1（25μg·kg-1）、rhGLP-1（25μg·kg-1）或生理鹽水對(duì)GK Ⅱ型糖尿病大鼠體重?zé)o明顯影響（P>0.05）。 （二）sGLP-1 對(duì)胰島β細(xì)胞增殖和凋亡的影響 1. 用MTT 法觀察受試品對(duì)βTc3 細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)受試品sGLP-1 能明顯促進(jìn)體外培養(yǎng)的βTc3 細(xì)胞增殖，但量效關(guān)系不明顯。 2. 大鼠胰腺石蠟切片H

8、E 染色顯示連續(xù)注射sGLP-1（25μg·kg-1）的實(shí)驗(yàn)組大鼠胰島明顯大于連續(xù)注射安慰劑的模型對(duì)照組大鼠胰島。實(shí)驗(yàn)組大鼠胰島呈不規(guī)則形態(tài)，多圍繞胰胰小導(dǎo)管分布，胰島之間有擴(kuò)散、相互連接的趨勢(shì)，這種結(jié)構(gòu)極少見(jiàn)于對(duì)照組且特征不明顯。 3. 免疫熒光染色技術(shù)標(biāo)記Caspase-3（綠）和Insulin（紅），熒光顯微鏡觀察顯示實(shí)驗(yàn)組大鼠胰腺胰島素（Insulin）陽(yáng)性β細(xì)胞形成形狀不規(guī)則的聚集體，且明顯大于對(duì)照組；實(shí)驗(yàn)組大鼠胰島β

9、細(xì)胞聚集體中僅有部分呈Caspase-3 陽(yáng)性，而對(duì)照組大鼠胰島β細(xì)胞聚集體則全部呈Caspase-3 陽(yáng)性；此外，對(duì)照組大鼠胰島β細(xì)胞的Caspase-3 熒光標(biāo)記強(qiáng)度明顯高于實(shí)驗(yàn)組。 4. 免疫熒光染色技術(shù)標(biāo)記Ki-67（紅）和Insulin（綠），熒光顯微鏡觀察顯示實(shí)驗(yàn)組大鼠胰腺Ki-67 陽(yáng)性β細(xì)胞周圍分布有大量的Insulin 陽(yáng)性β細(xì)胞，而其本身則表現(xiàn)為Insulin 陰性；對(duì)照組大鼠胰腺Ki-67 陽(yáng)性β細(xì)胞周圍雖