慢性HBV感染不同階段細(xì)胞免疫及其與病毒清除的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　 研究慢性HBV感染不同階段細(xì)胞免疫及其與病毒清除的關(guān)系。
　　 方法：
　　 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)50例慢性HBV感染者外周血的T細(xì)胞亞群。選擇其中進(jìn)行肝組織穿刺活檢術(shù)的慢性乙型肝炎住院病例40例，留取活檢肝組織分別進(jìn)行蘇木素伊紅染色和免疫組織化學(xué)CD4、CD8染色，并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)肝組織內(nèi)的HBV-DNA定量。10例正常對(duì)照肝組織選自肝血管瘤手術(shù)患者瘤旁正常肝組織。
　　 結(jié)果

2、：
　　 1.慢性HBV感染組與正常對(duì)照組T細(xì)胞亞群比較。
　　 T細(xì)胞亞群在慢性HBV感染組與正常對(duì)照組間比較，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。然后將慢性HBV感染組根據(jù)HBV-DNA定量分為HBV-DNA陽(yáng)性組和HBV-DNA陰性組比較發(fā)現(xiàn)：HBV-DNA陽(yáng)性組的CD4+T細(xì)胞百分率及CD4/CD8比值較HBV-DNA陰性組及正常對(duì)照組明顯降低（P<0.05，P<0.01，P<0.05，P<0.05），但是T細(xì)胞亞

3、群在HBV-DNA陰性組與正常對(duì)照組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 2.慢性HBV感染的不同階段外周血T細(xì)胞亞群的變化。
　　 外周血T細(xì)胞亞群在慢性HBV感染免疫耐受期、免疫清除期、低（非）復(fù)制狀態(tài)、再激活期、正常對(duì)照組5組間比較CD4+T細(xì)胞百分率及CD4/CD8比值差異顯著（P<0.05，P<0.05），進(jìn)一步進(jìn)行組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn)：免疫清除期的CD4+T細(xì)胞百分率及CD4/CD8比值較低復(fù)制狀態(tài)明顯減低

4、（P<0.05，P<0.05）；免疫清除期及免疫耐受期的CD4+T細(xì)胞百分率、CD4/CD8比值均較正常對(duì)照組明顯減低（P<0.01，P<0.05， P<0.05，P<0.05）；其它組間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 3.外周血T細(xì)胞亞群與外周血及肝組織中HBV-DNA定量的相關(guān)性分析。
　　 CD4/CD8比值與外周血HBV-DNA定量呈負(fù)相關(guān)（r=-0.308，P<0.05）。CD3+T細(xì)胞百分率

5、、CD4+T細(xì)胞百分率、CD8+T細(xì)胞百分率與外周血HBV-DNA定量無(wú)相關(guān)性。外周血T細(xì)胞亞群與肝組織中的HBV-DNA定量亦無(wú)相關(guān)性。在慢性HBV感染的不同階段，亦未發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞亞群與HBV-DNA定量相關(guān)。
　　 4.肝組織中CD4、CD8陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)。
　　 正常肝組織中有少量CD4和CD8陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，慢性乙型病毒性肝炎患者的肝組織中可見(jiàn)CD4陽(yáng)性及CD8陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，CD4陽(yáng)性細(xì)胞主要集中在匯管區(qū)，CD8陽(yáng)性

6、細(xì)胞主要聚集在匯管區(qū)及炎性肝細(xì)胞的周?chē)?br>　　 5.CD4、CD8陽(yáng)性細(xì)胞在HBV-DNA不同復(fù)制狀態(tài)肝組織中的表達(dá)。
　　 CD4、CD8陽(yáng)性細(xì)胞在慢性HBV感染者肝組織中的表達(dá)明顯多于正常肝組織的陽(yáng)性表達(dá)量（P<0.01，P<0.01）。CD4、CD8陽(yáng)性細(xì)胞在HBV-DNA陽(yáng)性組肝組織中的表達(dá)明顯多于正常對(duì)照組（P<0.001，P<0.001），也多于HBV-DNA陰性組，但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，P>0

7、.05）；CD8陽(yáng)性細(xì)胞在HBV-DNA陰性組肝組織中的表達(dá)明顯多于正常對(duì)照組（P<0.01），但是CD4陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)在兩者間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 6.CD4陽(yáng)性細(xì)胞在慢性HBV感染不同階段肝組織中的表達(dá)。
　　 免疫清除期、低復(fù)制狀態(tài)及再激活期3組CD4陽(yáng)性細(xì)胞明顯多于正常對(duì)照組（P<0.001，P<0.001，P<0.001）。免疫耐受期CD4陽(yáng)性細(xì)胞明顯低于免疫清除期及再激活期（P<0.0

8、5，P<0.01）。其余組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 7.CD8陽(yáng)性細(xì)胞在慢性HBV感染不同階段肝組織中的表達(dá)。
　　 慢性HBV感染的4個(gè)不同階段CD8陽(yáng)性細(xì)胞均多于正常對(duì)照組（P<0.05，P<0.05，P<0.01 P<0.01）。CD8陽(yáng)性細(xì)胞在免疫耐受期的表達(dá)明顯低于再激活期（P<0.05）。其余組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 8.免疫活動(dòng)期（免疫清除期和再激活期）

9、細(xì)胞免疫狀態(tài)的變化。
　　 肝組織中CD4、CD8陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)在此期明顯高于免疫耐受期（P<0.01，P<0.05），CD4陽(yáng)性細(xì)胞在此期的表達(dá)明顯多于低復(fù)制狀態(tài)組（P<0.05），CD8陽(yáng)性細(xì)胞在此期的表達(dá)也多于低復(fù)制狀態(tài)，但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 外周血CD4+T細(xì)胞的百分率與外周血的HBV-DNA定量呈負(fù)相關(guān)（r=-0.481，P<0.05）。
　　 根據(jù)轉(zhuǎn)氨酶的升高情況分為小于2×U

10、LN（正常值上限）和大于2×ULN兩組，在ALT≥2×ULN組中外周血CD4/CD8比值與肝組織中的HBV-DNA定量呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.829，P<0.05）。在小于2×ULN組中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)類(lèi)似變化。
　　 9.對(duì)外周血HBV-DNA定量與肝組織HBV-DNA定量進(jìn)行Spearman相關(guān)分析。
　　 外周血HBV-DNA定量與肝組織HBV-DNA定量顯著正相關(guān)（r=0.779，P<0.001）。
　　 10.

11、肝組織及血清HBV-DNA的檢測(cè)。
　　 在血清HBV-DNA定量陽(yáng)性的肝組織中均能檢測(cè)到HBV-DNA的復(fù)制，而且在8例低復(fù)制狀態(tài)組血清HBV-DNA陰性的肝組織內(nèi)仍然可以檢測(cè)到HBV-DNA的復(fù)制。
　　 結(jié)論：
　　 1.慢性HBV感染時(shí)，機(jī)體及肝臟局部均存在免疫功能異常，HBV-DNA的復(fù)制加重了這種變化。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HBV-DNA陽(yáng)性組外周血的CD4+T細(xì)胞百分率及CD4/CD8比值明顯低于陰性組及正常對(duì)

12、照，HBV-DNA陽(yáng)性組肝組織中浸潤(rùn)的CD4、CD8陽(yáng)性細(xì)胞明顯多于正常。
　　 2.慢性HBV感染的不同階段機(jī)體及肝臟局部所處的免疫狀態(tài)不同。免疫清除期外周血CD4+T細(xì)胞百分率及CD4/CD8比值明顯低于低復(fù)制狀態(tài)，免疫活動(dòng)期肝內(nèi)浸潤(rùn)的CD4、CD8陽(yáng)性細(xì)胞多于免疫耐受期及低復(fù)制狀態(tài)。
　　 3.CD4+T細(xì)胞的減少不利于病毒的清除，而病毒的持續(xù)高復(fù)制狀態(tài)可能影響了CD4+T細(xì)胞的增殖。在免疫活動(dòng)期，外周血CD4+T