家兔低血鉀模型中骨骼肌鉀離子的變化及其機制的探討.pdf

1、目的：應用低鉀飼料致家兔低血鉀模型，測定家兔血漿鉀離子濃度，以觀察低鉀程度，同時觀察骨骼肌組織鉀離子，鈉離子，鎂離子含量，細胞膜上Na，K-ATP酶活性及α1α2亞型的表達情況，探究缺鉀時家兔血漿鉀，骨骼肌組織內(nèi)鉀離子含量的變化規(guī)律，并初步探討其變化的機制。
　　 方法：清潔級健康家兔48只，體重2.0～2.7kg、兔齡12～14周，雄性（河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供），隨機分為6組，每組8只，按低鉀飼喂的時間分為正常對照組(A

2、組)、低鉀飲食3天組（B組）、低鉀飲食6天組(C組)、低鉀飲食9天組（D組）、低鉀飲食12天組(E組)、低鉀飲食15天組（F組）。家兔購入后先放置于安靜、舒適的環(huán)境中，正常飼喂一周后開始用家兔低鉀飼料飼喂，低鉀飲食期間自由攝取蒸餾水。以低鉀飲食開始前當天作為第0天，低鉀飲食后第1天作為第1天，依次類推。分別以低鉀飼喂第0天，第3天，第6天，第9天，第12天，第15天作為終點處死動物并留取相應標本。
　　 標本處理當天先取出家兔稱

3、重，記錄體重變化情況，后置于安靜環(huán)境下2小時。4％戊巴比妥于耳緣靜脈注射1ml/kg，麻醉后，迅速剪去家兔右下肢兔毛，以75％的乙醇溶液消毒右下肢，用大剪刀剪開其右下肢皮膚，分離筋膜，分別暴露分離比目魚肌和股靜脈。先由股靜脈留取血液樣本2ml,應用離子選擇電極法測定血漿鉀離子濃度，后取比目魚肌約2g，去除肌肉上的筋膜組織，準確稱重，用預冷生理鹽水沖洗比目魚肌組織，取濾紙反復吸干，放入標記好的凍融管，迅速置于液氮罐中冷凍保存。用以測定Na

4、，K-ATP酶活性，取材結(jié)束-70℃冰箱保存。比目魚肌Na，K-ATP酶活性按照考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒，檢測總蛋白含量后用超微量ATP酶測試盒檢測Na，K-ATP酶活性。取比目魚肌約35mg，去除肌肉上的筋膜組織，用預冷等滲氯化鋰沖洗，取濾紙反復吸干，準確稱重，-20℃保存。采用火焰原子吸收光度計測定骨骼肌組織內(nèi)鉀離子，鈉離子，鎂離子含量。取比目魚肌約500-600mg，去除肌肉上的筋膜組織，用預冷生理鹽水沖洗比目魚肌組織，取濾紙反復

5、吸干，放入凍融管，標上標簽，迅速置于液氮罐中冷凍保存，取材結(jié)束-70℃冰箱保存。采用Western blot測定A組D組F組比目魚肌Na，K-ATP酶α1，α2亞型表達。
　　 所有數(shù)據(jù)通過spss13.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)±標準差（(X)±s）表示，組間比較采用單因素方差分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.家兔低鉀飲食前后體重比較無統(tǒng)計學意義。
　　 2.低鉀飲食3天后即可觀察到血漿鉀離子下

6、降（P＜0.05），血漿鉀離子隨低鉀飲食天數(shù)增加而逐漸下降。
　　 3.低鉀飲食3天后，觀察比目魚肌組織內(nèi)鉀離子含量與A組相比開始降低(P＜0.05)，且隨著低鉀飲食天數(shù)增加，比目魚肌組織內(nèi)鉀離子含量逐漸降低。
　　 4.低鉀飲食3天后，觀察比目魚肌組織內(nèi)鈉離子含量與A組相比增加（P＜0.05），且隨著低鉀飲食天數(shù)增加，比目魚肌組織內(nèi)鈉離子含量逐漸增高。F組比目魚肌組織內(nèi)鎂離子含量相對A組降低(P＜0.05)。
　

7、　 5.低鉀飲食3天后，可觀察到比目魚肌Na，K-ATP酶活性下降(P＜0.05)，且隨著低鉀飲食天數(shù)增加，比目魚肌Na，K-ATP酶活性降低。
　　 6.D組比目魚肌Na，K-ATP酶α1亞型表達較A組無統(tǒng)計學差異，F(xiàn)組相對A組降低(P＜0.05)，D組α2亞型表達相對A組降低(P＜0.05)，F(xiàn)組相對A組顯著降低。
　　 結(jié)論：低鉀飲食可造成比目魚肌組織內(nèi)鉀離子含量降低，比目魚肌組織內(nèi)鈉離子顯著增高，鎂離子含量降低