凝血系統(tǒng)基因相關SNPs及其單體型與長沙地區(qū)漢族人群腦出血的關系研究.pdf

1、目的：本研究旨在長沙地區(qū)漢族人群中，按多基因復雜疾病研究策略及方案，首次同時在散發(fā)性腦出血患者與健康對照人群及有家族聚集現(xiàn)象的腦出血家系中研究凝血因子Ⅰ(coagulation factorⅠ，F(xiàn)1)基因、凝血因子Ⅶ(coagulation factorⅦ，F(xiàn)7)基因、蛋白Z(protein Z，ProZ)基因、凝血因子Ⅻ(coagulation factorⅫ，F(xiàn)12)基因及血小板膜糖蛋白Ⅰ a(glycoproteinⅠa，GPⅠa

2、)基因等凝血系統(tǒng)基因相關單核苷酸多態(tài)(single nucleotidepolymorphisms，SNPs)位點，比較其在不同群體中等位基因、基因型及單體型(haplotype)等遺傳學分子標記物的差異并分析其與腦出血的關聯(lián)，從分子水平探討腦出血的可能發(fā)病機理，為預防和治療腦出血提供堅實的理論依據(jù)和實踐指導。
　　 方法：收集2006年1月至2009年10月在湘雅醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診的腦出血患者及部分家屬的資料，所有病例均經(jīng)CT和

3、/或MRI確診(依照第四屆全國腦血管病學術會議診斷標準)；對照組來自同期湖南省長沙地區(qū)漢族健康體檢人員。研究對象分為3組：(1)有家族聚集現(xiàn)象的腦出血家系(cerebral hemorrhage with family history，CHFH)組(65個家系共281例，包括腦出血患者65例，Ⅰ級親屬133例，Ⅱ級親屬36例、Ⅲ級親屬10例和健康無血緣關系親屬37例)，(2)散發(fā)性腦出血(sporadic cerebral hemorr

4、hage，SCH)組(195例)，及(3)對照組(116例)。CHFH組、SCH組與對照組的年齡、性別具有可比性。采用多重單堿基延伸SNP(Multiplex SnaPshot)分型技術對F1基因相關SNPs位點(rs1800790、rs1800787、rs6050)、F7基因相關SNPs位點(rs510317、rs6046)、ProZ基因相關SNPs位點(rs2273971、rs3024718、rs3024731)、F12基因相關SN

5、P位點(rs1801020)及GPⅠa基因相關SNP位點(rs1126643)進行基因分型。對不同人群的基因分型結果分兩部分進行統(tǒng)計：(1)SCH組和對照組采用基于人群的病例-對照研究法，采用χ2檢驗按Hardy-Weinberg平衡法檢測樣本的群體代表性。用χ2檢驗及Logistic回歸分析，研究等位基因及基因型分布規(guī)律，從而篩查出與散發(fā)性腦出血相關的基因；用haploview軟件構建單體型塊(haplotype block)；用PH

6、ASE軟件構建單體型，用χ2檢驗及Logistic回歸分析探討單體型與腦出血的相關性，進一步篩查出與散發(fā)性腦出血相關的基因：(2)CHFH組采用基于家系的傳遞不平衡檢驗(transmission disequilibriumtest，TDT)及關聯(lián)分析法，用FBAT軟件研究等位基因及單體型與腦出血的相關性，從而篩查出與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血相關的基因。
　　 結果：
　　 1.本研究結果顯示在長沙地區(qū)漢族人群中存在F1基

7、因rs1800790、rs1800787、rs6050，F(xiàn)7基因rs510317、rs6046，ProZ基因rs2273971、rs3024718、rs3024731，F(xiàn)12基因rs1801020及GPIa基因rs1126643此10種SNPs位點。
　　 2.本研究結果顯示在長沙地區(qū)漢族人群中，GPIa基因rs1126643多態(tài)的T等位基因在SCH組中的頻率為0.339，明顯高于對照組(0.228，P=0.004)。Logis

8、tic回歸分析顯示T等位基因與散發(fā)性腦出血相關，是散發(fā)性腦出血的保護性因素(OR=0.577，95％CI：0.396—0.840，P=0.004)。但F1基因rs1800790、rs1800787、rs6050SNPs位點，F(xiàn)7基因rs510317、rs6046 SNPs位點，ProZ基因rs2273971、rs3024718、rs3024731 SNPs位點及F12基因rs1801020 SNP位點的等位基因頻率在SCH組與對照組間比

9、較均無顯著性差異(P>0.05)。
　　 3.本研究結果顯示在長沙地區(qū)漢族人群中，GPIa基因rs1126643多態(tài)的CT及TT基因型在SCH組中的頻率分別為0.455與0.111，明顯高于對照組(分別為0.404與0.026，P=0.022)。Logistic回歸分析顯示CT及TT基因型均與散發(fā)性腦出血相關，且均是散發(fā)性腦出血的保護性因素(OR=0.180，95％CI：0.051—0.631，P=0.007；OR=0.267，

10、95％CI：0.076-0.943，P=0.040)。但F1基因rs1800790、rs1800787、rs6050 SNPs位點，F(xiàn)7基因rs510317、rs6046 SNPs位點，ProZ基因rs2273971、rs3024718、rs3024731 SNPs位點及F12基因rs1801020 SNP位點的基因型頻率在SCH組與對照組間比較均無顯著性差異(P>0.05)。
　　 4.本研究結果顯示在長沙地區(qū)漢族人群SCH組

11、及對照組中，F(xiàn)1基因的rs1800790、rs1800787、rs6050 SNPs位點位于同一單體型塊(D’均>0.7)，其構成的單體型GCA(rs1800790+rs1800787+rs6050)、單體型GA(rs1800790+rs6050)及單體型CA(rs1800787+rs6050)均可增加散發(fā)性腦出血的危險度近2倍(OR=1.738，95％CI：1.103—2.740，P=0.017)。其構成的其它所有主要單體型頻率在SC

12、H組及對照組間比較，結果無顯著性差異(P>0.05)。蛋白Z基因rs2273971、rs3024718、rs3024731 SNPs位點位于同一單體型塊(D’均>0.7)，而F7基因rs510317及rs6046 SNPs位點可能位于同一單體型塊(D’>0.5)，F(xiàn)7基因rs6046及蛋白Z基因rs3024718亦可能位于同一單體型塊(D’>0.5)。但上述3個單體型塊中的SNPs構建出的所有主要單體型頻率在SCH組及對照組間比較，結果

13、亦均無顯著性差異(P>0.05)。GPIa基因rs1126643及F12基因rs1801020 SNPs位點可能不在同一單體型塊中(D’<0.5)。
　　 5.本研究結果顯示在長沙地區(qū)漢族人群CHFH組中，ProZ基因rs2273971多態(tài)的G等位基因存在過度傳遞現(xiàn)象，與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血相關(Z=1.882，P=0.049882)；而其A等位基因及rs3024718、rs3024731 SNPs位點的各等位基因無過度傳遞現(xiàn)

14、象，與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血無關(Z<0和/或P>0.05)。且F1基因rs1800790、rs1800787、rs6050 SNPs位點，F(xiàn)7基因rs510317 SNP位點，GPIa基因rs1126643及F12基因rs1801020 SNPs位點的各等位基因亦均無過度傳遞現(xiàn)象，與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血無關(Z<0和/或P>0.05)。因本研究樣本中攜帶F7基因rs6046 SNP位點的核心家系數(shù)不足FBAT軟件的要求的最低10個，

15、其等位基因TDT檢驗未能得到結果。
　　 6.本研究結果顯示在長沙地區(qū)漢族人群CHFH組中，F(xiàn)7基因rs510317、rs6046與蛋白Z基因rs2273971、rs3024718、rs3024731SNPs位點在同一個單體型塊中(0

16、過度傳遞現(xiàn)象，與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血相關；其構成的其余所有單體型均無過度傳遞現(xiàn)象，與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血無關。F1基因rs1800790、rs1800787、rs6050 SNPs位點在同一個單體型塊中，GPIa基因rs1126643與F12基因rs1801020 SNPs位點亦在同一個單體型塊中，但它們各自構成的所有單體型均無過度傳遞現(xiàn)象，與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血無關。
　　 結論：
　　 1.本研究首次發(fā)現(xiàn)長沙地

17、區(qū)漢族人群中凝血系統(tǒng)基因存在遺傳異質(zhì)性，為遺傳因素可能是長沙地區(qū)漢族人群腦出血的發(fā)病機理之一提供了進一步的證據(jù)。
　　 2.本研究在國內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn)F1基因單體型GCA、單體型GA及單體型CA均是散發(fā)性腦出血的遺傳易感因素，但與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血無關；且F1基因rs6050位點可能是散發(fā)性腦出血的重要遺傳易感因素。而GPIa基因rs1126643多態(tài)的T等位基因及CT、TT基因型則均是散發(fā)性腦出血的保護性因素，但與有家族聚集現(xiàn)

18、象的腦出血無關；且T等位基因可能是散發(fā)性腦出血的重要遺傳保護性因素。
　　 3.本研究在國內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn)ProZ基因rs2273971多態(tài)的G等位基因、單體型GA、單體型CG及單體型CGA均與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血相關，但與散發(fā)性腦出血無關。且ProZ基因rs2273971 SNP位點G等位基因可能是有家族聚集現(xiàn)象腦出血的重要相關因素。
　　 4.本研究首次發(fā)現(xiàn)在長沙地區(qū)漢族人群中，F(xiàn)7基因rs510317多態(tài)、ProZ基