食管癌組織的蛋白質(zhì)組學(xué)分析及在食管癌患者血清中檢測(cè)RegIα蛋白的臨床意義.pdf

1、食管癌是中國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,河北省磁縣更是我國(guó)食管癌高發(fā)地區(qū)之一,據(jù)調(diào)查,在我國(guó)高發(fā)區(qū)食管癌具有明顯陽(yáng)性家族史和家族聚集性,在我們的前期流行病調(diào)查中,70％的磁縣食管癌患者具有明確食管癌家族史。雖然近10年來(lái)人們?cè)趯ふ沂彻馨┫嚓P(guān)蛋白方面作了大量工作,但至今未發(fā)現(xiàn)與食管癌發(fā)生密切相關(guān)的蛋白。為了較好的分析與食管癌發(fā)生有關(guān)的蛋白質(zhì),本實(shí)驗(yàn)對(duì)河北省磁縣家族性食管癌患者(具備環(huán)境因素和遺傳背景的相似性,可減少多種混雜因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響)

2、進(jìn)行了研究,旨在尋找并驗(yàn)證與食管癌發(fā)生相關(guān)的蛋白質(zhì)。
　　 腫瘤蛋白質(zhì)組技術(shù)已成為目前科技研究的前沿領(lǐng)域,特別是在腫瘤標(biāo)志物的篩選方面更有優(yōu)勢(shì),本實(shí)驗(yàn)采用蛋白質(zhì)雙向凝膠電泳技術(shù)對(duì)同一患者食管癌組織和正常食管粘膜組織(距腫瘤邊緣5厘米以上的食管粘膜組織)的蛋白質(zhì)表達(dá)譜進(jìn)行自身對(duì)照分析,建立高分辨的2D圖譜,并對(duì)部分差異表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行質(zhì)譜分析,探討與食管癌發(fā)生可能相關(guān)的特異性差異蛋白。
　　 在此基礎(chǔ)上,我們?cè)趯ふ业降呐c食

3、管癌發(fā)生可能相關(guān)的特異性差異蛋白中挑選RegⅠα僅蛋白,應(yīng)用ELISA的方法分析食管癌患者血清中該蛋白的表達(dá)情況,進(jìn)一步驗(yàn)證RegⅠα蛋白與食管癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。
　　 第一部分食管癌組織的蛋白質(zhì)組學(xué)分析
　　 目的:探討具有家族史的食管癌組織和正常食管組織內(nèi)蛋白質(zhì)組的表達(dá)差異,為尋找參與食管癌發(fā)生的相關(guān)蛋白奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:實(shí)驗(yàn)所用食管癌組織及正常食管粘膜組織標(biāo)本取自河北省磁縣具有不同癌性家族史的食管癌

4、患者10例,其中男性患者6例,女性患者4例,術(shù)后病理論斷由河北省磁縣醫(yī)院病理科和河北省人民醫(yī)院病理科共同診斷證實(shí)為不同階段的食管鱗狀細(xì)胞癌。
　　 應(yīng)用雙向凝膠電泳方法對(duì)所得的蛋白質(zhì)表達(dá)譜進(jìn)行自身對(duì)照分析,每個(gè)標(biāo)本的雙向凝膠電泳均同時(shí)做3張,目的是驗(yàn)證組織蛋白質(zhì)譜的可靠性。應(yīng)用ImageMauster2 Delite凝膠分析軟件對(duì)10對(duì)標(biāo)本中的位點(diǎn)特征基本相同的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行定位。并以雙盲法對(duì)所選蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行割取、處理、質(zhì)譜分析和

5、數(shù)據(jù)庫(kù)查詢。
　　 結(jié)果:10例食管癌組織中有(45±12)個(gè)蛋白為新增蛋白,同時(shí)相對(duì)正常食管組織中有(9±3)個(gè)蛋白缺失,隨機(jī)選擇其中的18個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn),9個(gè)蛋白質(zhì)與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化和腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。其中8個(gè)在腫瘤組織中特異表達(dá),1個(gè)缺失。腫瘤組織表達(dá)的8個(gè)蛋白分別為:突變?chǔ)?球蛋白、AnnexinⅠ/Ⅱ、鋅指蛋白14、未命名蛋白、再生基因1蛋白、nm23、熱休克蛋白(HSP)70。
　　 結(jié)論:1建立了分

6、辨率較高的食管癌組織雙向電泳圖譜。2識(shí)別鑒定出了部分與腫瘤相關(guān)的蛋白質(zhì),為進(jìn)一步篩選食管癌特異性的分子標(biāo)志物奠定了基礎(chǔ)。
　　 第二部分在食管癌患者血清中檢測(cè)RegⅠα蛋白的臨床意義
　　 目的:檢測(cè)RegⅠα蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌患者血清中的表達(dá),并分析其表達(dá)水平與食管癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。
　　 方法:40例食管癌患者為河北省人民醫(yī)院胸外科與河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院胸外科2008年9月～2008年10月的手術(shù)患者

7、,術(shù)后病理論斷由河北省人民醫(yī)院病理科及河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院共同診斷證實(shí),診斷有差異者請(qǐng)第三家醫(yī)院會(huì)診。依據(jù)術(shù)后病理將40例食管癌患者分成不同亞組。應(yīng)用酶聯(lián)免疫(ELISA)的方法檢測(cè)患者血清RegⅠα蛋白水平。結(jié)果判斷:每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值減去零孔的OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度及吸光度做出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)各待測(cè)樣品吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出相應(yīng)濃度,再根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算出實(shí)際濃度。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:應(yīng)用SPSS11.0對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢

8、驗(yàn)和方差分析,P≤0.05表明有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:①血清中RegⅠα蛋白在食管癌手術(shù)切除后,表達(dá)水平明顯下降(P<0.001),術(shù)后7天,其水平接近于正常水平。②RegⅠα蛋白在腫瘤大小為≤3cm,介于3cm到5cm,≥5cm三組患者血清中的表達(dá)值分別為20.12±1.67ng/L、24.32±3.16 ng/L、29.67±4.24 ng/L,經(jīng)分析P=0.974,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③RegⅠα蛋白在高、中、低分化鱗癌患者

9、血清中的表達(dá)值分別為20.78±1.27 ng/L、24.27±2.36 ng/L、31.33±4.81 ng/L,經(jīng)分析P=0.001,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④按浸潤(rùn)深度分為浸潤(rùn)到粘膜層、淺肌層、深肌層、纖維膜、周圍組織5組,患者血清中Reg Ia蛋白的表達(dá)值分別為22.65±3.24 ng/L,24.50±4.25 ng/L,26.23±5.39 ng/L,25.38±7.79 ng/L,25.03±8.49 ng/L,經(jīng)分析P=0.8

10、74,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑤在有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清中RegⅠα蛋白的表達(dá)值分別為29.56±3.86 ng/L、21.31±2.22 ng/L,經(jīng)分析P=0.003,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 RegⅠα蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與食管癌的大小、浸潤(rùn)深度無(wú)明顯相關(guān),但與食管鱗癌分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移明顯相關(guān),隨著分化程度的減低RegⅠα蛋白的表達(dá)強(qiáng)度逐漸增高,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者血清中RegⅠα蛋白的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于非轉(zhuǎn)移組。