斑痣盤菌目莖生種的分類及針葉樹生散斑殼屬分子生物學(xué)研究.pdf

1、斑痣盤菌目(Rhytismatales)是世界菌物資源中的一個重要組成部分。本文采用現(xiàn)代菌物學(xué)技術(shù),從形態(tài)解剖學(xué)、個體發(fā)育學(xué)、生態(tài)與地理分布等方面對斑痣盤菌目部分莖生種進行了較深入的分類研究。同時,采用10個重復(fù)性好的隨機引物對針葉樹生散斑殼屬(Lophodermium Chevall.)的22個菌株進行ISSR-PCR擴增反應(yīng),通過ISSR分析結(jié)果結(jié)合表型性狀的比較和分析,進一步明確了針葉樹生散斑殼屬若干種內(nèi)和種間的親緣關(guān)系。主要研究

2、結(jié)果如下： 1.以Darker(1967)、Cannon & Minter (1986)、Kirk et al. (2001)等人提出的分類觀點為主要依據(jù),對采自安徽天堂寨國家森林公園、黃山風(fēng)景區(qū)以及保藏于安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)森保教研室(AAUFP)的標(biāo)本進行鑒定、分類。研究了異盤菌屬(Ascodichaena)的多皺異盤菌(A. rugosa),散斑殼屬(Lophodermium)的葛藤散斑殼(L. puerariae)、莖生散斑殼(

3、L. caulinum)、茶生散斑殼(L. camelliicola)、三尖杉散斑殼(L. cephalotaxi),齒裂菌屬(Coccomyces)的小齒裂菌(C. leptideus)、臺灣齒裂菌(C. taiwanensis),以及皮下盤菌屬(Hypoderma)的野珠蘭皮下盤菌(H。stephanandrae)8個種,其中多皺異野盤菌為中國新紀(jì)錄科、屬、種,葛藤散斑殼和莖生散斑殼為新種。編制了二叉式分種檢索表,各種均附有形態(tài)解剖

4、學(xué)特征的描述與圖解以及寄主、生境的記載,并加以討論。 2.利用改良的氯化芐法對22個針葉樹生散斑殼屬(Lophodermium)菌株進行DNA提取。通過對模板DNA濃度、引物濃度、Mg2+濃度、dNTPs濃度、Taq DNA聚合酶濃度以及退火溫度等條件進行優(yōu)化,建立了該類菌物ISSR-PCR反應(yīng)的最佳體系,即在15μl反應(yīng)體積中,DNA模板(45ng/μl)2.0μl,隨機引物(10μM)0.6μl,MgCl2(25mM)1.5

5、μl,dNTPs(10mM)0.3μl,Taq酶(5U/μl)0.3μl,10×PCR buffer1.5μl,ddH2O 8.8μl。利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對源于安徽黃山風(fēng)景區(qū)以及天堂寨國家森林公園的22個針葉樹生散斑殼屬菌株進行了基因組親緣關(guān)系的分析。采用篩選出的10個隨機引物,通過ISSR-PCR擴增反應(yīng),共獲得擴增條帶167條,其中特異性條帶160條,占95.8％；通過歐氏最短距離中的類平均法聚類,得到各菌株之間的遺傳距離在5