空氣污染物對哮喘動物模型作用的實驗研究.pdf

1、第一部分：柴油廢氣顆粒對哮喘模型大鼠血清中IgE和肺組織中IL-5、IFN-γ表達的影響
　　目的:探討柴油廢氣顆粒對哮喘模型大鼠血清中IgE和肺組織中IL-5、IFN-γ表達的影響。
　　方法:選擇Wistar雄性大鼠60只，隨機分為6組，對照組（A組）10只，哮喘模型組（B組）10只（卵清白蛋白于第1，8,15天腹腔注射致敏，第22天霧化吸入激發(fā))，DEP組（C、D、E、F組分別吸入DEP200μg/ml第1,2,3,4

2、周）每組各10只。應用多道信號采集處理系統(tǒng)檢測氣道阻力(RL)；采用Wright-Giemsa染色觀察BALF中的嗜酸性粒細胞（EOS）的募集和肺組織病理改變；采用ELISA法分別檢測血清中IgE和肺組織中的IL-5和IFN-γ表達水平。
　　結(jié)果:正常對照組的氣道阻力，BALF中EOS募集，血清中IgE，肺組織中IL-5和IFN-γ的表達分別為3.578±0.226,（0.581±0.197）％，20.242±2.143，16.

3、294±1.758，63.423±6.337；與對照組比較，哮喘模型組的氣道阻力，BALF中EOS募集，血清中IgE和肺組織中IL-5顯著性增加（P<0.01），而肺組織中IFN-γ的表達明顯減少，比較有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。與哮喘模型組比較，DEP組的氣道阻力，BALF中EOS募集，血清中IgE，肺組織中IL-5均顯著性增加，隨著DEP吸入時間延長，增加更明顯（P<0.01）,而肺組織中IFN-γ的表達明顯減少（P<0.01）。

4、氣道阻力的增高與DEP吸入時間呈顯著正相關(guān)(r=0.856，P﹤0.01)。肺組織切片中，正常對照組可見完整的上皮細胞，氣道周圍極少見嗜酸性粒細胞的浸潤；哮喘模型組大鼠可見支氣管黏膜纖毛上皮細胞排列紊亂，部分脫落，其杯狀細胞出現(xiàn)增生，氣管壁各層均有少量的嗜酸性粒細胞浸潤；DEP組大鼠隨著DEP各1、2、3、4周的吸入，上皮細胞成簇脫落，氣管壁周圍嗜酸性粒細胞聚集大量增加，基底膜纖維化變。
　　結(jié)論: DEP的吸入可加重哮喘模型大鼠

5、的氣道高反應和肺部炎癥改變。
　　第二部分：二氧化硫暴露對哮喘模型大鼠IgE、IL-13和肺組織中NF-B、TNF-α表達的影響。
　　目的：探討二氧化硫暴露對哮喘模型大鼠IgE、IL-13和肺組織中NF- B、TNF-α表達的影響。
　　方法：選擇Wistar雄性大鼠40只，隨機分為4組。正常對照組（A組）10只，哮喘模型組（B組）10只，利用卵清白蛋白于第1，8，15天給予腹腔注射致敏，第22天給予卵清白蛋白激發(fā)，

6、二氧化硫暴露組分為C組和D組，各10只，分別暴露二氧化硫濃度為15mg/m3和30mg/m3。采用多道信號采集處理系統(tǒng)測量氣道阻力，采用ELISA法、免疫組織化學染色分別檢測血清中IgE和IL-13的濃度，肺組織中NF- B及TNF-α陽性表達。
　　結(jié)果：對照組的氣道阻力，血清中IgE、IL-13濃度分別為101.344±6.892,835.50±415.31，243.50±136.46，與對照組比較，哮喘模型組的氣道阻力，血清

7、中IgE、IL-13濃度顯著性增加（F=160.541，F(xiàn)=28.715，F(xiàn)=25.707，P<0.01）；與哮喘模型組比較，SO2組的氣道阻力顯著性增加（P<0.01），而血清中IgE、IL-13濃度未見明顯增加（P>0.05）；對照組胞漿中可見弱的NF- B表達（淺黃色），但幾乎無陽性TNF-a表達；哮喘模型組NF- B、TNF-a表達較對照組顯著性增強（P<0.01）。肺組織切片中，哮喘模型組支氣管黏膜上皮細胞脫落，氣管壁周圍有少

8、量的嗜酸性粒細胞浸潤；SO2組支氣管黏膜上皮細胞脫落面積逐漸增大，杯狀細胞大量增生，氣管壁周圍嗜酸性粒細胞聚集大量增加，基底膜纖維化變。
　　結(jié)論：SO2暴露可激活NF- B和促進TNF-α表達增強導致的肺部炎癥反應。
　　第三部分：熒蒽暴露對哮喘模型小鼠血液中IgE、IL-4、IL-5和肺組織中MDA、SOD、GSH-Px表達的影響
　　目的：探討熒蒽暴露對哮喘模型小鼠血液中IgE、IL-4、IL-5和肺組織中MDA

9、、SOD、GSH-Px表達的影響。
　　方法：選擇雄性Balb/c小鼠40只，隨機分為4組。A組為正常對照組（10只），B組為哮喘模型組（10只），熒蒽暴露組（C組和D組分別給予暴露10ug/m3和100ug/m3C濃度的熒蒽）（各10只）。各組攻擊結(jié)束一周后，再給予3%卵清白蛋白激發(fā)氣道30分鐘，利用多道信號采集處理系統(tǒng)測定氣道阻力；采用Wright-Giemsa染色和HE染色觀察支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸性粒細胞（E

10、OS）的募集和肺組織病理形態(tài)學改變；采用TBA法，黃嘌呤氧化酶法，二硫代二硝基苯甲酸法，ELISA法分別檢測肺組織中丙二醛水平（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、IgE、IL-4、IL-5的表達。
　　結(jié)果：A組的氣道阻力，BALF中嗜酸性粒細胞發(fā)的募集分別為3.61±0.89，（0.59±0.032）%，B組氣道阻力值，BALF中EOS募集較A組顯著性增加(P<0.01)，熒蒽暴露組氣道阻力

11、，BALF中EOS募集較模型組顯著性增加(P<0.01)；哮喘模型組肺組織中SOD、GSH-Px的含量與正常對照組略有下降，MDA有所升高（P>0.05），熒蒽暴露組肺組織中SOD、GSH-Px的含量較哮喘模型組明顯下降，MDA明顯升高(F=35.471，F(xiàn)=19.463，F(xiàn)=91.742,P<0.01)；哮喘模型組中血清中IgE、IL-4、IL-5濃度較正常對照組顯著性增加（F=38.812，F(xiàn)=45.481，F(xiàn)=14.229，P<0

12、.01），熒蒽暴露組血清中IgE、IL-4、IL-5濃度較哮喘模型組略有增加（P>0.05）；肺組織病理切片中哮喘模型組中出現(xiàn)上皮細胞有不同程度脫落、中斷、壞死，氣道周圍嗜酸性粒細胞浸潤及血管周圍水腫；熒蒽暴露組上皮細胞明顯破壞、脫落，大量嗜酸性粒細胞浸潤，血管周圍明顯水腫。
　　結(jié)論：熒蒽暴露可加重哮喘模型小鼠的脂質(zhì)過氧化反應和肺部炎性反應。
　　第四部分：萘暴露對哮喘模型小鼠血液中IgE、IL-4、IL-5和肺組織中VE

13、GF、MMP-9、TIMP-1表達的影響
　　目的：探討萘暴露對哮喘模型小鼠血液中IgE、IL-4、IL-5和肺組織中VEGF、MMP-9、TIMP-1表達的影響。
　　方法：選擇雄性Balb/c小鼠50只，隨機分為5組。A組為正常對照組（10只），B組為哮喘模型組（10只），萘暴露組（C組、D組和E組分別給予暴露50mg/m3、250mg/m3、500ug/m3濃度的萘）（各10只）。測定氣道阻力；采用Wright-Gie

14、msa染色和HE染色觀察支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸性粒細胞（EOS）的募集和肺組織病理形態(tài)學改變；采用免疫組織化學方法和ELISA法分別檢測肺組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1（TIMP-1）和血清中IgE、IL-4、IL-5的表達。
　　結(jié)果：正常對照組的氣道阻力，BALF中嗜酸性粒細胞募集分別為3.389±0.147，（0.49±0.042）%，哮喘模型組氣

15、道阻力，BALF中EOS募集較對照組顯著性增加(P<0.01)，萘暴露組氣道阻力，BALF中EOS募集較模型組顯著增加(P<0.01)，隨著萘的暴露濃度的增高，氣道阻力，BALF中EOS募集增加更明顯；對照組小鼠肺組織中可見弱的VEGF、MMP-9、TIMP-1表達；哮喘模型組肺組織細胞漿內(nèi)見VEGF、MMP-9、TIMP-1不同程度的陽性表達，可見胞核著色，與對照組比較有顯著性差異（P<0.01）。同哮喘模型組比較，萘暴露高濃度組肺組

16、織中VEGF、MMP-9、TIMP-1表達顯著性增高(P<0.01)；萘暴露中、低濃度組VEGF、MMP-9、TIMP-1表達未見顯著性增高（P>0.05）。MMP-9與TIMP-1的比值升高。MMP-9與VEGF呈正相關(guān)（P<0.01）。哮喘模型組中血清中IgE、IL-4、IL-5濃度較正常對照組顯著性增加（F=41.213，F(xiàn)=47.824，F(xiàn)=18.045，P<0.01），萘暴露組血清中IgE、IL-4、IL-5濃度較哮喘模型組未