曲妥珠金納米探針乳腺癌細(xì)胞暗場(chǎng)檢測(cè)及體外抑制效應(yīng).pdf

1、世界范圍內(nèi)，乳腺癌發(fā)病率與死亡率高，是影響女性健康的重要疾病。其中HER-2(Humanepid ermalgrowthfactor receptor-2)蛋白過表達(dá)乳腺癌，傳統(tǒng)檢測(cè)易誤診、漏診，在治療過程中易產(chǎn)生副作用及引發(fā)不良預(yù)后。隨著納米科技理論的進(jìn)步及納米顆粒制備工藝的改善，因金納米顆粒獨(dú)特的理化特性，將其引入腫瘤醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，對(duì)乳腺癌的檢測(cè)與治療有創(chuàng)新意義。
　　目的：
　　通過金納米顆粒制備及曲妥珠金納米探針合成，探

2、討顆粒毒性、探針暗場(chǎng)應(yīng)用及處理乳腺癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)效果，為乳腺癌納米醫(yī)學(xué)診斷與治療研究提供依據(jù)。
　　方法：
　　以檸檬酸鹽還原法制備金納米顆粒(Goldnanoparticles，GNPs)，對(duì)顆粒進(jìn)行透射鏡(TEM)表征及紫外吸收光譜檢測(cè)，通過靜置檢測(cè)金納米顆粒時(shí)間穩(wěn)定性;GNPs通過靜電作用吸附曲妥珠單抗(Herceptin)，進(jìn)而合成曲妥珠金納米探針(GNP@Herceptin)，表征及穩(wěn)定性檢測(cè)方法同GNPs;中科院上海

3、細(xì)胞庫購買人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、SK-BR-3，免疫組化檢測(cè)細(xì)胞HER-2蛋白表達(dá);利用掃描電鏡(SEM)，檢測(cè)定位于細(xì)胞膜表面GNP@Herceptin，并在暗場(chǎng)環(huán)境下觀察細(xì)胞膜上GNP Herceptin;設(shè)置0-400mg/mL7濃度梯度GNPs，并設(shè)置培養(yǎng)液空白組，細(xì)胞增殖抑制劑盒檢測(cè)GNPs細(xì)胞毒性;設(shè)置0-200ng/mL7濃度梯度GNPs、Herceptin和GNP Herceptin，并設(shè)置培養(yǎng)液空白組，細(xì)胞增殖抑制

4、試劑盒檢測(cè)MCF-7與SK-BR-3細(xì)胞增殖抑制效果;設(shè)置0-1.0μg/mL4濃度梯度Herceptin、GNP Herceptin，細(xì)胞凋亡試劑盒檢測(cè)SK-BR-3細(xì)胞凋亡，細(xì)胞周期試劑盒檢測(cè)SK-BR-3細(xì)胞周期阻滯;運(yùn)用SPSS21.0對(duì)同種細(xì)胞不同濃度顆粒毒性、抗體與探針增殖抑制、細(xì)胞凋亡及周期阻滯數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，同一濃度兩種細(xì)胞顆粒毒性數(shù)據(jù)及抗體與探針最佳處理劑量采用兩組獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平α為0.05。

5、　　結(jié)果：
　　金納米顆粒近似圓形，粒徑大小(14.11±1.13)nm，并可與曲妥珠單抗成功吸附，溶液澄清透亮，穩(wěn)定性好;GNPs與Herceptin結(jié)合率為2.25∶1，結(jié)合效果好;通過SEM檢測(cè)，可發(fā)現(xiàn)定位于細(xì)胞膜表面的GNPs@Herceptin，并且在暗場(chǎng)環(huán)境下，可看到SK-BR-3細(xì)胞周圍的橘黃色生物探針;GNPs濃度在400μg/mL時(shí)，MCF-7細(xì)胞存活率減少至43.9％(t=39.709，P=0.001)，在10

6、0μg/mL時(shí)，SK-BR-3細(xì)胞存活率為65.1％(t=6.796，P=0.002)，均有明顯細(xì)胞毒性效果，但金納米顆粒濃度下降至50μg/mL時(shí)，SK-BR-3與MCF-7細(xì)胞生存率分別為82.8％(t=1.979，P=0.119)、99.3％(t=0.177，P=0.868)，且未顯示出細(xì)胞增殖抑制效果，說明低濃度GNPs有良好的生物相容性。Herceptin處理SK-BR-3細(xì)胞后，最佳用藥劑量為7.143ng/l×104細(xì)胞，

7、GNP Herceptin處理細(xì)胞后最佳用藥量從50ng/mL降低至25ng/mL，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=14.774，P＜0.001);GNP Herceptin最高濃度處理細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞凋亡率從9.37％增大至16.87％，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.537，P=0.001)，G1期阻滯從74.70％增大至83.12％，差異具有統(tǒng)計(jì)意義(t=5.286，P=0.006)，G2/M期細(xì)胞數(shù)從14.14％減少至6.22％，差異具有統(tǒng)